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标题:【求助】无磷酸化抗体如何检测磷酸化

superboy[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】无磷酸化抗体如何检测磷酸化


本人实验做一个新的分子，其在损伤后丝氨酸出现磷酸化。由于没有相关的磷酸化抗体，该怎么检测？多谢指点！
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am10[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

确定只是丝氨酸磷酸化吗，有Thr磷酸化吗？后者是有抗体的。
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加碱性磷酸酶去磷酸化可不可以呢？
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果你知道是哪个位点被磷酸化了，你可以将该位点突变成丙氨酸，测序后，再做免疫印记的实验，如果条带不再上移（与未突变的相比），是不是可以说明你的问题呢？
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发表于 2014-6-27 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可采用磷酸化蛋白质染色试剂盒（如Pierece公司、Molecular Probe公司）染色确定其是否磷酸化。
再采用质谱确定其磷酸化位点。
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superboy[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可不可以用丝氨酸磷酸化的抗体做免疫沉淀，然后再用你的蛋白的抗体去做western，或者反一下。这样不就可以证明你的蛋白有没有被磷酸化了？
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