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标题:【求助】跑蛋白电泳时，用100V恒压，电流怎么那么大？

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】跑蛋白电泳时，用100V恒压，电流怎么那么大？


跑蛋白电泳时，用100V恒压，电流怎么那么大？而且是逐渐变大，从170mA升到300mA多。电泳时间很长，都到了4小时才跑完。
我每次都新配缓冲液：
Tris 1.5
甘氨酸 7.2
SDS 0.5
定容到500ML 调PH 到8.3
高手看看有何问题，谢谢了
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yonger[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. 首先确定你胶的面积,面积大电流也会相应大一些，长度大时间也长。.500ml缓冲液应该是mini胶,我跑1.5cm浓缩胶80V ~30min，6cm分离胶160V ~2h，电流在30mA左右，你的是太大。但100V跑4h也不算太长。
2. 你缓冲液配方没问题.不过我们配电缓从来不调PH,按配方PH就是8.3。请确定试剂和PH是正确的
3. 我跑胶恒压电流会逐渐减小。所以你电流过大并逐渐增大是电阻减小造成的。仔细检查线路，从阴极--缓冲液--胶--缓冲液--阳极有没有短路的地方，尤其是阴阳极的缓冲液之间。还有一个就是胶板是否紧密接触以保证上下槽缓冲液不接触。有短路则电流增大。因为是并联，所以恒压时胶两端的有效电压还是正常的。但如果你恒流的话，则短路后加在胶两端有效电压会降低，则跑胶时间明显延长。
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
“胶板是否紧密接触以保证上下槽缓冲液不接触”能给我详细解释一下么？
我不怎么明白
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电极缓冲液的PH值不合适,无论怎样,用稳压跑,电流应该越来越低才对
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ero11[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

从你第二次问题（三楼）估计电泳槽装配有些问题，能说说是什么样的吗，帮你分析一下，直接找我也行
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

但是别的同学用这个电泳槽的时候是正常的，只有我用的时候不正常！
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is2011[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请不要调整 running buffer的pH
配方 TRIS 25mM
Glycine 192mM
SDS 0.1%
绝对不要调整 pH值 使用上面配方即可 保证ok
调整pH会造成BUFFER中有氯离子影响电泳
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发表于 2014-6-27 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

内外槽液体交通了吧
注意电泳液量
内槽液体不超过长玻璃板
检查无胶板侧玻璃板是否紧密贴合
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yonger[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
“胶板是否紧密接触以保证上下槽缓冲液不接触”能给我详细解释一下么？
我不怎么明白

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因为不同型号和厂家的电泳仪其组装也不同。所以不知道你的电泳仪长的什么样子。主要就是按照从阴极--缓冲液--胶--缓冲液--阳极这样一个顺序检查有没有短路的地方。所谓“胶板是否紧密接触以保证上下槽缓冲液不接触”是说胶板和上下槽连接的地方漏不漏液体，因为电流可能绕过胶而从这里通过。
仅靠说没有感性认识，我觉得最好的办法是让你们实验室的资深实验员旁观你的整个操作过程。因为只有你做才出现此情况，也就是说中间肯定有一处精细操作可能你没有注意到。经验丰富者可能发现实验的关键之处。我一开始做实验时也遇到过类似情况。你可一试。
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-6-27 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看来大家的意见基本一致，还是从使用安装上找找原因，多说说大家会发现问题。虽然不同厂家的有些区别，但是大同小异。希望能帮得上你，你要是在北京，我真可以去看你的操作
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