蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】如何快速灭活体系里的胰酶

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】如何快速灭活体系里的胰酶

锤子[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74069
精华 0
积分 192
帖子 123
信誉分 100
可用分 1376
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
1

发表于 2014-6-28 09:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】如何快速灭活体系里的胰酶


由于实验需要，蛋白酶解后的体系里需要迅速将胰酶灭活，但不希望影响酶解产生的肽段，不知什么方法好一些，将胰酶沉淀可以吗？
谢谢帮助！：）
顶部
bamboo16[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79663
精华 2
积分 572
帖子 696
信誉分 104
可用分 4391
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-12-14
状态 离线
2

发表于 2014-6-28 09:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知楼主所用的胰酶和细胞培养中所用的胰酶是否一致，如果一致，可加入Ca2+或小牛血清抑制其活性。也就是细胞培养中中和胰酶的办法。
顶部
49888[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
3

发表于 2014-6-28 09:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

沉淀不行，可以用蛋白酶抑制剂或者直接开水煮几分钟．
顶部
锤子[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74069
精华 0
积分 192
帖子 123
信誉分 100
可用分 1376
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
4

发表于 2014-6-28 09:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不好意思，胰酶的说明书里为什么说Ca2+可以促进其活性？
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
5

发表于 2014-6-28 09:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看来楼主所说的胰酶和细胞培养所用胰酶不是同一种酶，细胞培养中所用的胰酶中加入EDTA效果更好，而后者是钙镁离子鳌合剂，看来这样不行了，没有太好的建议了。多谢提醒。楼主再想想别的办法吧。祝试验顺利
顶部
锤子[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74069
精华 0
积分 192
帖子 123
信誉分 100
可用分 1376
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
6

发表于 2014-6-28 09:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的胰酶是蛋白质酶解用的胰酶，然后是做质谱鉴定的，但实验需要，必须将胰酶灭活。
感谢大家的帮助，有机会多交流！
顶部
xue258[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75643
精华 0
积分 746
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
7

发表于 2014-6-28 09:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用10%的TFA和15%的乙腈，只要调整体系的pH就可以了。然后就可以做质谱鉴定。
祝实验愉快！
顶部