【求助】SDS胶的配制

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标题:【求助】SDS胶的配制

chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-6-28 11:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

大家做2-DE第二相SDS电泳时所配的胶和普通的SDS-PAGE电泳的分离胶是不是一样呢?

yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-6-28 11:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

给你一个我做的比较好的2-DE第二向的12％SDS胶的配方，你可以参考一下啊。
60ml 12%的SDS—PAGE凝胶配方
液体体积（ml）
30%丙烯酰胺/0.8%甲叉双丙烯酰胺 24
1MTris.cl pH8.8 15
MilliQ水 19.8
10%SDS 0.6
10%过硫酸胺（APS） 0.6
TEMED 0.024
效果不错哦，1MTris.cl pH8.8 建议用成品。

yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-6-28 11:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不好意思啊，打快了点哦。Tris.cl pH8.8 15ml 浓度应该是1.5M。

chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-6-28 11:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

多谢啦，刚开始做蛋白质组，实在是经验欠缺，电泳图一塌胡涂，真的是急呀

yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-6-28 11:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

发个图上来看看，我帮你分析下了，我做了2年多了也算小有经验了。

chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-6-28 11:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白的上样量为200ug, 考马斯亮兰染色，胶条是7cm的。
跑第二相的时候别人告诉我先用10mA跑40min,然后换用20mA跑到底，但是我的电流是10mA的时候电压就达到了400V，所以也不敢再加大电流了，就这样10mA一直跑了6h，怎么会这样呢，是样品处理的问题还是聚焦的问题？
图片太大了，传不上来。