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标题:【求助】做不出结果

dreaming[使用道具]
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发表于 2014-6-28 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】做不出结果


各位大哥 大姐姐 ,小弟最近做wb,电泳 转膜结果都比较理想,, 分子量43kd我封闭1 个小时,在加一抗是zymed的兔抗人 的cx43,洗4次 2抗是羊抗兔,也是洗4次用的是pbst,但是显影以后 在mark 43kd以上的蛋白都有亮 但是小于这个数值的蛋白都没有显影.究竟是为什么 ?我老板需要我5天内出结果 ,,我实在做不出来 ,,请大家指点啊 求求你们拉
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2014-6-28 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是跑过了啊？
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nn255[使用道具]
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发表于 2014-6-28 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你配置的SDS胶浓度是多少啊，有可能跑过了都不知道
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发表于 2014-6-28 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

10%的胶,按照那条件 应该是跑不出去的啊 我今天又做了下 ,时间减少了半个小时,不知道会是什么结果 mark今天跑的很漂亮 比以前的好的多 但是今天是我最后一批蛋白了 我现在没细胞了 也就根本没蛋白 ,我的赌注全部在上面了 做出来 了 研究生还有的读 做不出来 我真的要退学了
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hulu呼噜[使用道具]
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发表于 2014-6-28 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电转什么条件多长时间，转完膜之后用丽春红染一下膜看看有没有蛋白条带，胶也然一下，在考虑是否继续，细胞裂解的量是多少
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发表于 2014-6-28 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我转膜转的不错 立春红染色也很好看 , 一抗2小时,2抗2小时,但是一显影 却尽是杂带 ,目的条带也有,但杂带的颜色比目的条带还深, 值得说下的是,我做的是兔的细胞,我用的抗体却是兔抗老鼠的, 大家快说说 这究竟是什么回事情,一抗我很怀疑有问题的,但是我老板却认为国外有人发表了文献 用了这个抗体做了兔子,他就认定了 我也一定能做出来 ,
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发表于 2014-6-28 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我一抗和你一样，但没有孵育那么长时间一个半而已
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发表于 2014-6-28 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我上样量是15微升,封闭可能是短了点 是2 小时, 我下次尝试过夜
昭昭wang 美女同志....谢谢你对我的关心.,我想知道你用的是什么抗体 ,做的是什么细胞 ,我现在的抗体被我拿来当兔抗兔使用, 我的一抗的说明书上可没写对 兔子的有用,是指明了对鼠和人有特异性!! 我赋予一个半小时也搞过 效果差不多!!!诶 希望你再给我点意见吧
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2014-6-28 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦，大家共勉吧，我不太记得是抗什么的了，我做的是连接蛋白43，兔来源的吧，二抗山羊抗兔，我觉得你目的条带出来了就ok吧，我作也有杂带啊。我封闭也是四度过夜，我觉得也是你封闭的不好。加油，我也只做出来一个抗体，也不好毕业啊。
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ffaa[使用道具]
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发表于 2014-6-28 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

2抗孵育时间过长,1H足以
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