蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】western时封闭液、一抗、二抗用什么配好啊？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】western时封闭液、一抗、二抗用什么配好啊？

baidukk[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77444
精华 0
积分 803
帖子 1226
信誉分 100
可用分 7048
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
1

发表于 2014-6-30 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western时封闭液、一抗、二抗用什么配好啊？


PBS TBS or TBST ?
顶部
tuuu2[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77597
精华 0
积分 507
帖子 674
信誉分 100
可用分 4211
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-18
状态 离线
2

发表于 2014-6-30 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般说来，封闭液用洗涤液配就可以了，一抗，二抗用封闭液配就可以了。我做的时候用的是PBST.如果你作的是western可以参考以下的内容
Western blotting 实验方法参照《分子克隆实验指南》进行:按SDS-PAGE 常规电泳
方法,采用12 %的分离胶,浓缩胶的电流为10 mA ,分离胶的电流为15 mA ,每孔加约50μg 样本,转膜采用100 mA 的电流,时间为2 h ,膜为PVDF 膜,转膜前用甲醇浸泡10 min左右,封闭液为Pierce 公司产品,漂洗液为PBS +50 %的吐温,一抗稀释度为1∶200 ,二抗稀释度为1∶1 000 ,温育时间均为室温1 h ,显色液为Pierce 公司
产品。其余步骤按常规操作。
顶部
is2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75851
精华 0
积分 510
帖子 680
信誉分 100
可用分 4233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
3

发表于 2014-6-30 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们做时用TBST洗膜，所以用TBST配封闭液，用封闭液配一抗和二抗。二抗稀释度为1：5000，也有人用1：8000
顶部
831226[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79782
精华 0
积分 770
帖子 1240
信誉分 100
可用分 6976
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
4

发表于 2014-6-30 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
All depends.
Most of time, antibodies diluted in blocking solution should be OK, but, some antibodies may require special dilution solution, such as 5% BSA in TTBS.
顶部
DONT[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73548
精华 0
积分 449
帖子 557
信誉分 100
可用分 3626
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
5

发表于 2014-6-30 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们也用TBST（0.05%Tween-20）、5%BSA
顶部
qqq111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73201
精华 0
积分 830
帖子 1238
信誉分 101
可用分 7086
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
6

发表于 2014-6-30 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1×TBST +5%脱脂奶粉w/v
顶部
whitesheep[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78856
精华 0
积分 825
帖子 1330
信誉分 100
可用分 7476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-4
状态 离线
7

发表于 2014-6-30 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大家了，呵呵，我今天做出像条带的东东了，准备重复一下。
顶部
plaa[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77350
精华 0
积分 464
帖子 588
信誉分 100
可用分 3778
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
8

发表于 2014-6-30 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

封闭液：我们用TBST（0.1%Tween-20）配5%脱脂奶粉w/v [光明牌比较好]
一抗、二抗：用TBST（0.1%Tween-20）配
顶部
ladyhuahua[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76658
精华 0
积分 984
帖子 1667
信誉分 100
可用分 9116
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-8
状态 离线
9

发表于 2014-6-30 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室做Western封闭液一直用TBS＋0.05%(v/v)Tween 20+3%BSA(v), pH7.5一抗是用封闭液稀释的，二抗用TBST2（50 mM Tris, 150mMNaCl, 0.1(v/v) Tween)+1%BSA稀释的。
做的western结果都不错（注：我们实验室一直以葡萄果实为试验材料）
祝好运！
顶部