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标题:【求助】提蛋白怎么出现絮状沉淀

damingxia0904[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】提蛋白怎么出现絮状沉淀


我在提Hela细胞的核蛋白时，用
- HEPES pH 7.9 10 mM
- MgCl2 1.5 mM
- KCl 10 mM
- DTT 0.5 mM
-NP-40 0.2%
Including Protease inhibitors : - Aprotinin 100 μg/ml
- Leupeptin 5 μg/ml
- Pepstatin 1 μg/ml
- PMSF 0.5 mM
低渗缓冲液裂解细胞膜时，在冰上肿胀了15分钟，结果细胞全成了絮状沉淀，显微镜下观察好像都是一团一团的，似乎是全破裂掉了。
请问大家碰到过这种情况吗？是不是因为用了NP-40的原因？
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

NP40的浓度再Check一下吧。太高的话核膜也裂掉了
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IAM007[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

you can add more cell lysate buffer in.
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也出现了相应的问题，对结果没有影响吧！
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damingxia0904[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 dog002 于 2014-6-30 16:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我也出现了相应的问题，对结果没有影响吧！

可是我想要的是核蛋白,那第一步细胞如果就全部破碎了,胞浆蛋白和核蛋白就混在一起了.你也是这样子做的吗?结果的浓度如何?

[ 本帖最后由 damingxia0904 于 2014-6-30 16:24 编辑 ]
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