【求助】western 怎么we不出来啊

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标题:【求助】western 怎么we不出来啊

8princess8[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的目的蛋白是350kd的，转膜如果是稳压需要多大电压，又需要多少时间呢？请高手指点啊，多谢多谢！急急急！

831226[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们实验室是用的恒流的！电流为PVDF膜面积的1.5倍，单位是mA,一般转膜一个小时！你试试看！我做过很多次都成功的阿！

66+77[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

300或者400mA，1.5-2h.
可以用预染Marker，这样可以监测转膜情况

987789[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

350KD的目的蛋白可是很大了,关心你的SDS-PAGE是怎么跑的,多少的胶?可以跑进分离胶吗?我记得我跑12%的胶时,蛋白MARKER中最大的110KD的条带都在分离胶的顶部了。建议考虑跑胶条件。做WESTERN只要严格按照PROTOCAL 来操作，一两次之后应该没有问题的。半干式炭转移槽来转，跑恒流。我跑2倍膜面积，效果挺不错的。

tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问我170KD的蛋白,如何跑胶?
用百分之几的胶,跑多久?电压多大?

8princess8[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢各位啊，真是太感谢了，rain9205，你说的是半干式转法么，我用的湿转法，是不是半干转比湿转法好呢？

vivian4123[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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