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我在2004年做过cox－2的wb，效果不错。采用10％分离胶，蛋白上样量是13ug（bradford法），一抗是santa cruz的多抗，1：800（放置半年的抗体）稀释，RT孵育2h，我二抗的显色是采用pierce的发光液，效果不错，灵敏度很高，可以大大节省抗体的用量。至于目的蛋白的位置，在我的试验中并未出现大的位移，基本可以确定是正确的，你试验中是采用单抗，如果没有非特异性结合，发生条代位移不应该是抗体的问题，应考虑其他因素，如胶的浓度、蛋白质结构的再变化等，应具体问题具体分析。至于转膜，我是采用半干法与你不同，但转膜缓冲液应该是一致的：
2.9g 甘氨酸，5.8g Tris base，0.37g SDS, 200ml 甲醇（临用时加入），定容至1L。
