【求助】硫酸氨沉淀的蛋白直接跑SDS-PAGE有什么影响

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标题:【求助】硫酸氨沉淀的蛋白直接跑SDS-PAGE有什么影响

阿k[使用道具]
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发表于 2014-6-30 17:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位大侠，硫酸氨沉淀的蛋白跑SDS-PAGE，会有什么异常，能看到正常的条带，并能根据大小分开么？因为目的蛋白在沉淀中含量很少，担心脱盐后会损失很大。

glass[使用道具]
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发表于 2014-6-30 17:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

高浓度盐的存在会导致蛋白质样品电泳速度降低，拖后腿。
不过我认为，盐析出来的蛋白质溶于缓冲液后，硫酸铵浓度不算太高，对蛋白质电泳影响不大，能够根据分子大小分开的，不用担心。我用疏水柱层析后的洗脱液一直就是直接用来做SDS-PAGE的。
不过，楼主如果担心电泳不够美观，可以超滤除盐，或者透析，或者用分子筛凝胶除盐。后两者或会一定程度降低蛋白质样品浓度。

阿k[使用道具]
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发表于 2014-6-30 17:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

硫酸氨沉淀直接跑SDS-PAGE的话，有什么方面要改进，是不是要降低电压，增加时间呢？

remenb[使用道具]
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发表于 2014-6-30 17:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果缓冲液中含硫酸铵的话，要跑电泳也行，只是电压要降低，而且不同样品间最好能空隔一孔，避免样品间离子浓度不同而影响电泳的分离形为。

zhenxin[使用道具]
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