蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】凋亡指标BAX， BCL的WB条件

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】凋亡指标BAX， BCL的WB条件

wawa[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 71235
精华 0
积分 440
帖子 560
信誉分 100
可用分 3618
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-23
状态 离线
1

发表于 2014-6-30 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】凋亡指标BAX， BCL的WB条件


最近在做凋亡指标，总是做不出来，抗体都是买的知名公司产品，文献上都有报道过的，不知道是否有高手做过这方面的实验，指点一下
15%的胶，90v转膜2个小时，丽春红染色条带很清晰，转膜是没问题的，但最后结果就是不理想，背景很脏，杂带较多，不知道怎么办了
顶部
nn255[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76746
精华 0
积分 652
帖子 1024
信誉分 100
可用分 5877
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
2

发表于 2014-6-30 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用奶粉去背景了吗！
建议你作如下改动，如果你没有用奶粉去背景，那么就用奶粉去背景，并在四度过夜，这样以后基本上就不会有背景。
如果你已经用了上面的方法，你可以考虑改变一抗，二抗的浓度及反应时间！
顶部
wawa[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 71235
精华 0
积分 440
帖子 560
信誉分 100
可用分 3618
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-23
状态 离线
3

发表于 2014-6-30 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢，我用了奶粉，不过是室温1小时，我试一试你的方法
顶部
mimili_901[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73543
精华 0
积分 564
帖子 723
信誉分 102
可用分 4458
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
4

发表于 2014-6-30 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做过BAX 的WB，用的是中山分装的，结果还可以，我的WB 结果都是转膜后5％奶粉封闭2小时后，1％BSA稀释抗体（因为这样可以回收抗体下次再用）4度过夜，5％奶粉洗三次15min,二抗1小时，PBS T或TBST洗三次15min后曝光
顶部
wawa[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 71235
精华 0
积分 440
帖子 560
信誉分 100
可用分 3618
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-23
状态 离线
5

发表于 2014-6-30 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢，请问楼上的一抗后是用奶粉洗吗，一般不是都用TBST洗吗，还是再重新封闭一下
顶部
mimili_901[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73543
精华 0
积分 564
帖子 723
信誉分 102
可用分 4458
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
6

发表于 2014-6-30 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一抗后是用奶粉洗,5％奶粉洗三次,每次15min,二抗1小时，PBS T或TBST洗三次每次15min后曝光，我一直都是这样做的，不管是什么抗体，结果每问题
顶部
cwcwcww[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 101434
精华 1
积分 311
帖子 277
信誉分 102
可用分 2191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2012-12-3
状态 离线
7

发表于 2014-6-30 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这两个我以前都做过啊,没有什么特别啊,和普通的WB一样的,用的抗体是SANTA CRUZ的
顶部
windboy[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114504
精华 0
积分 196
帖子 111
信誉分 100
可用分 1317
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
8

发表于 2014-6-30 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

BAX 和BCL2做WB结果很一般。不过想要阳性的结果的话，也可以凑合着用。实验结果重在分析嘛，哈哈。
不过假如我是老板的话，我是不会让我的学生做这两个蛋白的WB的。浪费钱不说，结果还不可信。
顶部