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标题:【求助】小分子蛋白tricine-SDS 电泳只跑到分离胶的一半...

wu11998866[使用道具]
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【求助】小分子蛋白tricine-SDS 电泳只跑到分离胶的一半...


现在做tricine电泳分离7K的蛋白,伯乐的电泳仪,10mA(40v), 1.5h,20mA(100V) 2.5h,溴酚蓝跑到胶底部,但是染色后组织蛋白只跑到分离胶的一般左右,而且溴酚蓝在浓缩胶的时候呈一条线,但是经过积层胶到电泳结束,溴酚蓝模糊成团状,但是蛋白条带是清晰的(除了最后一团块),请问这是怎么回事?请指教。
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wu11998866[使用道具]
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如图:


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2014-6-30 18:13
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wu11998866[使用道具]
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有站友遇到类似的问题:
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2792702_1.html')
可能的情况有:1.浓缩胶太短;2.样品浓度过太大;3.电泳的缓冲液有问题,要用新的;4.进入分离胶后的电压是否小了。5.提取蛋白时,离心速度不够。有颗粒物。
多摸素,好运!!!
说明:1,浓缩胶有1cm,2,从图上看浓度好像不大啊,3,都是新的,4,有100v,5,样品比较清亮,况且marker也没有跑下来
1、分离胶的配置是否有问题,尤其是分离胶缓冲液的pH值是否正确。
2、内外电泳槽的电泳液是否有交通:因为tricine电泳的阴极缓冲液与阳极缓冲液成分及pH不同,如果相交通,也无法跑出漂亮的结果来。
PH值准确,用的是伯乐的电泳槽,应该没有交联,
跑了几次都是这样, 不知如何是好
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bamboo16[使用道具]
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样品浓度过太大
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wu11998866[使用道具]
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谢谢,我稀释一下试试看看
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请问你的问题解决了吗
我的和你的问题差不多,小分子量的蛋白感觉都没了!
也是伯乐的槽子和电泳仪
解决了
请告诉我改进的方法
谢谢了


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2014-6-30 18:14
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wu11998866[使用道具]
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将样品倍比稀释8倍,16倍,32倍,只是下面一大坨变成了一条线,约15K处,感觉地下还是光板,请问该如何解决?
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wu11998866[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 kent 于 2014-6-30 18:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
可能是你电泳缓冲液或者是胶的PH值不对

按照文献,阳极缓冲液调到8.9,阴极的文献说不用调,约8.25左右,配胶还要调PH值吗?
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wu11998866[使用道具]
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我的意思是配胶你用的tris buffer是否有问题,PH值准吗.
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wu11998866[使用道具]
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是准的,不过既然这么说了我明天重配
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