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WB内参可选用b-actin或GAPDH,两者都可以,不过b-actin用的比较多一点,膜蛋白和胞浆蛋白都可以用这两种做内参。
另外,我有一个观点不同于上面两位战友的:
1.b-actin是现在普遍认为做内参的比较合适的蛋白,它在一般条件下是不变的,即使变化,也很微弱,相比于其它蛋白,还是比较合适的。
2.WB做内参是必要的。我和几个从国外比较大的实验室回来的人交流过,其实他们常规都要做内参的。我们看到的很多国外文献上的WB没有内参的data是因为他们都把那个做为常规来做,只是自己来参考上样量是不是一致的,所以很多人都不把内参的data发表在正式的文献上。
此外,关于actin是不是禾目的蛋白一起孵育要看你的目的蛋白和actin分子量相差大不大,如果相差不大,一起孵育是不合适的,如果相差较大,那还要看你的目的蛋白和actin所选用的一抗二抗会不会发生交叉反应,如果没有交叉反应,可以考虑一起孵育。