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标题:【求助】膜蛋白WB的内参一般用什么

fqswdzd[使用道具]
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【求助】膜蛋白WB的内参一般用什么


我想做一个膜蛋白半定量,提取时按膜蛋白提取方案,那一般是用什么做内参呢?谢谢告知!
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xue258[使用道具]
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我一般用
Beta Actin
我的系统是mamalian Cell.
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ritou1985[使用道具]
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GAPDH你也可以做的,还有actin
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yhz1973[使用道具]
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也可以对凝胶染色进行定量。
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wood533[使用道具]
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不好意思。问一些可能你们觉得很简单的问题。GAPDH全称是什么?是内参的一种吗?内参在western中究竟有何意义?
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duoduo[使用道具]
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做WB,根本不需要内参。我做WB去年一年做了五百多个,从来没用过内参。假如想控制一下上样量的话,可以用INDIA INK 染一下,大体上证实一下上样总蛋白是相同的即可。这样的方法足可以发影响因子大于5分的SCI文章了。
分子生物学方面的技术是很粗的,只要对得起自己的良心就行了。
哈哈!
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duoduo[使用道具]
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顺便说一下,actin 做内参很不合适,我给大家一下图大家一看就知道了。
B-actin 变化是如此明显的,它不具备做内参的起码条件。很多人一直在用,不过是人云亦云吧。
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dog002[使用道具]
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如果做内参用actin,和所作蛋白的单抗可以一起加了孵育吗,还是要一个一个加
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wmp1234[使用道具]
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WB内参可选用b-actin或GAPDH,两者都可以,不过b-actin用的比较多一点,膜蛋白和胞浆蛋白都可以用这两种做内参。
另外,我有一个观点不同于上面两位战友的:
1.b-actin是现在普遍认为做内参的比较合适的蛋白,它在一般条件下是不变的,即使变化,也很微弱,相比于其它蛋白,还是比较合适的。
2.WB做内参是必要的。我和几个从国外比较大的实验室回来的人交流过,其实他们常规都要做内参的。我们看到的很多国外文献上的WB没有内参的data是因为他们都把那个做为常规来做,只是自己来参考上样量是不是一致的,所以很多人都不把内参的data发表在正式的文献上。
此外,关于actin是不是禾目的蛋白一起孵育要看你的目的蛋白和actin分子量相差大不大,如果相差不大,一起孵育是不合适的,如果相差较大,那还要看你的目的蛋白和actin所选用的一抗二抗会不会发生交叉反应,如果没有交叉反应,可以考虑一起孵育。
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wood533[使用道具]
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一般是用国产的b-actin抗体还是进口的,结果差别大吗?
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