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标题:【求助】关于western的问题，很急

luoliqiong[使用道具]
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发表于 2014-7-1 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于western的问题，很急


各位大侠：
我配的分离胶不知道为什么总是不凝。已经配了三次了,真是很愁人。
配方如下：15ml
百分之三十的丙稀酰胺：6ml
分离胶缓冲液：3.75ml
去离子水：5.25ml
百分之十的APS：84.4ul
TEMED：22.5ul
请高手给指点一下，谢谢。
谢谢楼上的大侠们的帮忙。
我用的试剂是师姐留的。APS和TEMED是上学期买的。APS是我新配的。这两个试剂应该不会有问题。丙稀酰胺和分离胶缓冲液可是放了好久了，我师兄让我换换分离胶试试，不知道会不会凝。
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发表于 2014-7-1 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很可能是AP的问题
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2014-7-1 17:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得你要考虑这几个问题：
1、以前有没有出现过类似情况？如果没有，这一次的试剂和以前有什么不同？
2、同意楼上的观点，AP很重要，我们曾经用过国产的AP就出现过这种情况，改用进口的就好了。此外，AP要新鲜配制，4度存放不超过一周，时间长了会失效。
3、室温很重要，冬天PAGE胶不容易凝固。配好后放入37度烘箱会凝的比较快。
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-7-1 17:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果这些你都考虑到的话，应该不会出现不凝的现象，另外，如果你的室温较低的话，最好延长些时间
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qqq111[使用道具]
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发表于 2014-7-1 17:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

也有可能是丙稀酰胺的问题，有时候丙稀酰胺放一段时间就失效了，我现在正在做，并且胶总是不凝，后来换一种丙稀酰胺，结果就很好。换种丙稀酰胺试试，祝你成功！！
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luoliqiong[使用道具]
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发表于 2014-7-1 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上的大侠们的帮忙。
我用的试剂是师姐留的。APS和TEMED是上学期买的。APS是我新配的。这两个试剂应该不会有问题。丙稀酰胺和分离胶缓冲液可是放了好久了，我师兄让我换换分离胶试试，不知道会不会凝。
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发表于 2014-7-1 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
3、室温很重要，冬天PAGE胶不容易凝固。配好后放入37度烘箱会凝的比较快。
？？是吗？呵呵 印象中冬天凝得要快，这个反应是放热的吧
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发表于 2014-7-1 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
3、室温很重要，冬天PAGE胶不容易凝固。配好后放入37度烘箱会凝的比较快。

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？？是吗？呵呵 印象中冬天凝得要快，这个反应是放热的吧
呵呵，是吗？那请做过WESTERN的同志讨论一下PAGE胶是冬天凝的快还是夏天凝的快吧？
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am10[使用道具]
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发表于 2014-7-1 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前做过，夏天凝的慢，天冷的时候要快些。
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luoliqiong[使用道具]
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 小中大
请问丙稀酰胺最最多能放置多长时间？
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