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标题:【求助】过CM阳离子柱后，SDS—PAGE的总条带为什么...

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发表于 2014-7-5 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】过CM阳离子柱后，SDS—PAGE的总条带为什么...

求教各位高人，我原有蛋白样品为天然体液样品，有18条电泳条带，但用CM过柱后，各收集组分脱盐浓缩后的SDS电泳条带相加的总条带只剩6－8条了，为什么？
附上一张电泳图，请不吝赐教！


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发表于 2014-7-5 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

补充：上面电泳图左一泳道为上样的天然蛋白，2泳道为过CM柱分离到的第7组分，3和4泳道为第6组分的不同收集管。5－8为过CM柱分离到的第5－第2组分，第9泳道为marker，10泳道为第1组分。其中1、2组分为流穿峰。
该电泳图2－10泳道样品未经浓缩。其他经浓缩后的电泳图也与此差不多，但上部有时多两条带。总之比原样品条带少了。
另外，我感觉分离的效果也不是太好，该如何提高分辨率？
还想请教着色深的两条带会不会是糖蛋白？怎么从电泳图上初步判断那个蛋白是否是糖蛋白？
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发表于 2014-7-5 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再附上一张浓缩后的组分电泳图。marker前后是两次的CM组分浓缩液，从5－1，和从4－1。过CM柱后有时组分多有时少1－2条，也请高人指点。


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发表于 2014-7-5 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我分离的是一种未知蛋白，检测到活性的是分离后电泳条带最多的组分，该如何继续分离？
marker： 116 67 45 35 25 18 14
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发表于 2014-7-5 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很正常,因为纯化后不少组分被稀释或者没有被收集,所以电泳跑不出来,看不到,自然就少了.
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发表于 2014-7-5 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

问题是我几乎收集了UV检测到的所有峰,请chromatography先生再给点高见.也回答一下前面提到的其他问题.
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发表于 2014-7-5 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是因为有些浓度不一样了，染色灵敏度不够。
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发表于 2014-7-5 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢各位热情的回复！
有谁能回答一下前面提到的其他问题.
检测到活性的是分离后电泳条带最多的组分，该如何继续分离？
另外，我感觉分离的效果也不是太好，该如何提高分辨率？
还想请教着色深的两条带会不会是糖蛋白？怎么从电泳图上初步判断那个蛋白是否是糖蛋白？
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