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以下是我们的做法,供你参考(已经成功表达多个基因):
1.挑单克隆放入离心管中37度摇过夜(5ml左右即可)
2.过夜菌液按1:100稀释继续摇到对数中期(测OD值)
3.加IPTG诱导3-4小时
4.收集菌体,电泳.
其中第一步用试管即可,以下的步骤建议你用锥形瓶或烧瓶,具体用多大的瓶原则上按照:所摇的液体不超过瓶体积的20%,即1000ML的烧瓶别超过200ML.摇床转速一般在200转/分以上最好.
具体到条件的优化,最主要的是诱导时的温度(第3步),他关系到可溶性表达比例的高低,IPTG的浓度影响不是太大,因为你现在不表达,建议你用一个IPTG浓度(0.2-0.6都行)实验就行了,先确定到底表不表达,再考虑优化条件.
当然,每个基因不同所需的表达条件也不同,最终需要你自己摸索.
GOOD LUCK!