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标题:【求助】请教Western 的高手,关于460KD的蛋白

plaa[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教Western 的高手,关于460KD的蛋白

请教一下Western 的高手,我蛋白的分子量是460KD,用5%的积层胶和5%的分离胶跑了好几次,均没有出现我需要的条带.是不是我配的胶的浓度不对,可是胶的浓度太小,有很容易碎.请教一下我该怎么办
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ROSE李[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 plaa 的帖子

你的问题跟western有什么关系？先用考染确定点用没问题！
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49888[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你把分离胶配成10%的试一下
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u234[使用道具]
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 小中大

我估计是分离胶的浓度太低了，目的条带后来跑得太散，浓度不够，所以显示不出来。你可以这样：
1.先试一试8%的分离胶
2.跑大的密度梯度分离胶可能也会有收获。
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发表于 2014-7-5 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我估计是分离胶的浓度太低了，目的条带后来跑得太散，浓度不够，所以显示不出来。你可以这样：
1.先试一试8%的分离胶
2.跑大的密度梯度分离胶可能也会有收获。
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pengke1983[使用道具]
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 小中大
分离胶和积层胶都用６％或７％的胶尝试一下．
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发表于 2014-7-5 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

为什么用6％，7％或8％的分离胶，分子克隆上不是说，5％的分离胶范围是57KD－212KD，如果胶的浓度再大一些，是不是分离的分子量更小呢？如果用，460KD的蛋白能不能跑下来呢？那电泳需要什么条件、时间？电压？请教各位高手有没有跑过大于400KD的蛋白，尽情指点！实在不知怎么办
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分子式[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
400KD是整个蛋白分子的分子量吗？应该是由多个亚基构成的吧，跑胶要依据亚基的分子量吧
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PINK[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请跑过大分子蛋白的高手多多给予指点，我的实验也碰到相似的问题。
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ffaa[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我有个蛋白等电点为3.9，分子量约为9kda
用普通的Tricine sds page行吗？
不知道这个等电点会不会有影响。
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