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标题:【求助】为什么SDS-PAGE会出现"波纹"?

viviwang1987[使用道具]
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【求助】为什么SDS-PAGE会出现"波纹"?


在我的SDS-PAGE中,蛋白条带有的出现"波纹"状,条带不直,弯曲,请问这是什麽原因,如何解决呢?
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wawa[使用道具]
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我觉得可能有两方面原因:
1 样品处理问题,比方巯基乙醇挥发,sds不足等,建议重新配制上样液。
2 胶凝好以后,倒电泳液时在两块玻璃板间可能产生许多气泡,这会使电导不均匀,建议将产生的气泡用吸水纸洗掉。
3 配制的丙烯酰胺可能有一些沉淀或结晶,建议用滤纸过滤一下。
希望能对你有些帮助。
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zhenxin[使用道具]
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你把图贴上来看看.我觉得二向胶配制质量问题可能性更大一些.
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viviwang1987[使用道具]
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我的电泳图,请参考.


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2014-7-5 17:29
53069227.gif (15.49 KB)
 
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viviwang1987[使用道具]
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要是胶的问题,marker跑得还可以,没怎么弯曲啊?
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fox_79[使用道具]
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这是“smile band"
可能原因:
1 跑电泳时,过热。建议将低电压
2 分离胶不平。 分离胶灌完后,吸水时不要碰到界面。
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memory[使用道具]
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Marker没有什么问题,如果你做过重复试验,一直是这样的结果,就应该排除胶的问题。我跑电泳也出现过跟你十分类似的问题,我做的是组织中的全蛋白,开始百思不得其解,后来换了一种裂解液就跑出直线来了,可能是裂解液中的成分对电泳有影响。希望对你有帮助:)
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huifeng0516[使用道具]
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根据Marker来看胶的问题不大,可能是样品中的盐浓度太高,脱盐后试试。样品中有沉淀是不是裂解液里含有钾盐,上样前最好离心取上清。呵呵。
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鲇鱼少爷[使用道具]
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简单补充一下:
1.根据您的marker来看,三条带跑的不错,但是您的marker就三条带吗?如果不是,您的胶还是存在一定的问题的:1)胶的浓度有点低,marker的分子量相对小的跑了出去。2)您的试剂特别是APS和TEMED是不是有过期的造成胶的浓度低。
2.您的胶凝的稍有不匀,因为胶凝匀,电流均匀,就不会造成局部不匀引起,泳道斜,也会出现条带弯曲波纹等现象。
3.电极缓冲液没太大问题,因为marker的三条带不错,样品盐浓度高发生扩散可能性最大,楼上站友已提到。
建议:对样品进行脱盐处理,在检查试剂没有过期的前提下增大胶的浓度。
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