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标题:【求助】分离胶配好凝固后界面呈锯齿状

tudou85[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】分离胶配好凝固后界面呈锯齿状


如题，可能是什么原因呢？
我首先考虑到的是板子不干净，可是现在每次用之前都好好洗过擦干，还是解决不了问题。
后来又考虑是否封水的时候把上层打散了，注意了一下手法，可出来后还是那种锯齿状：（ 两块胶里有一块漏了一部分，反而界面比较平。
这是为什么呢？请牛人给分析一下，不胜感激！！
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发表于 2014-7-5 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
顶！我也遇到过这种情况。
我估计跟胶的配方有关系，是不是凝的太快了？
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vera+[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议用异丙醇封顶，凝三十分钟 ，然后倒掉异丙醇，用去离子水冲一冲，再加分离胶
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vera+[使用道具]
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 小中大
板子也要洗的干净一点
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zranqi_1[使用道具]
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 小中大
搂主是用什么东西封顶的?
假如是用水的话一定要轻轻沿壁加入,否则容易将未凝的胶冲开.
异丙醇则不会出现这种问题.
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得大家回答的已经很详细了，不过还要注意一下几点，
你的试剂是不是在低温保存的？如果试剂温度很低，而胶凝聚时的问题又很高（比如在温箱中）可能造成液体产生气体，使液面呈锯齿状；另外就是你凝胶时放置的地方是不是有震动？虽然很小的事情，也应该注意。
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发表于 2014-7-5 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如题，可能是什么原因呢？
我首先考虑到的是板子不干净，可是现在每次用之前都好好洗过擦干，还是解决不了问题。
后来又考虑是否封水的时候把上层打散了，注意了一下手法，可出来后还是那种锯齿状：（ 两块胶里有一块漏了一部分，反而界面比较平。
这是为什么呢？请牛人给分析一下，不胜感激！！！
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这个问题我遇见过！！！一开始也是这样胶面不气，后来听了个Western blot技术讲座，配制胶前用75%酒精棉球擦洗两块玻璃板各3次，蒸馏水洗3次，一切ok了 楼主不妨试试
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
主要还是加水封时太急，建议用200uL的枪头加。过硫酸铵不要加多了，如果怕凝的太快，可把配好的胶先放入冰箱中两分钟。再加过硫酸胺，这样能延缓一下。祝好！！！

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如题，可能是什么原因呢？
我首先考虑到的是板子不干净，可是现在每次用之前都好好洗过擦干，还是解决不了问题。
后来又考虑是否封水的时候把上层打散了，注意了一下手法，可出来后还是那种锯齿状：（ 两块胶里有一块漏了一部分，反而界面比较平。
这是为什么呢？请牛人给分析一下，不胜感激！！！
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okhaha[使用道具]
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 小中大

建议楼主配胶之前的板子一定要洗干净，就用清水洗就行，洗完之后最好不要擦，可以用空调吹干，现在是冬天，吹空调你也不会不舒服。但是我想这不是主要原因，主要原因我认为是在加分离胶之前应该将配好的胶充分混合，尤其是TMEMD，一定要让它均匀的散布于溶液中。加完之后最好能放在离空调近一点的地方，不然不容易凝固的，这一点我想也有作用。至于封水的速度我认为没关系，我每次都是1ml的水一次加入，但是没一点影响，因为无论你加的多快，在胶没凝固之前，胶都会沉在水下面的。
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plaa[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议用乙丁醇封胶，胶面特平，用水就容易出现这个问题。待分离胶凝固后倒掉乙丁醇，配浓缩胶或者加1×分离胶Buffer封，可隔天使用，效果更佳，因为胶凝固充分！
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