【求助】请帮我看一下这两张蛋白电泳图片

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标题:【求助】请帮我看一下这两张蛋白电泳图片

zbboom[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教为何左图带连成片，右图带中有凹陷，是否电压过大，我跑的60/150，急待，谢谢

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2014-7-5 21:18

77500803.jpg (48.35 KB)

tewank[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

胶没做好，谢谢；具体点，拔梳子时候把尺孔带坏了，前面那个估计是表达量太大了，正常

bring[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.你的上样量太大了，减少上样量
2.有凹陷，可能你的胶浓度有一点大，或凝的稍有不匀，再加上电泳时间稍长就发生凹陷了。

wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.你的上样量太大了，减少上样量
2.有凹陷，可能你的胶浓度有一点大，或凝的稍有不匀，再加上电泳时间稍长就发生凹陷了。
多谢指教，我上的15ul，不知是否过多，我是将样品跑道玻璃板底边约1厘米左右，一般都要跑到这里吧，要缩短时间是否要加大电压呢，我跑了1小时10分钟，用的BIO-RAD的电泳仪，多谢指教

greenbee[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教为何左图带连成片，右图带中有凹陷，是否电压过大，我跑的60/150，急待，谢谢

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目标带上部有一些扩散和拖尾，原因可能是煮沸时间不够、SDS相对蛋白用量偏低、蛋白浓度太高、盐浓度较高。
一般上样量为>15ug蛋白，loading buffer中sds与蛋白结合比例为1.4:1，通常需要3到4倍过量SDS。
适当电压调大些，我是用80/180来跑的，50分钟跑完。时间可以短些，防止弥散

zbboom[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果上样量减少，是否表达蛋白的带也会相应变细，这两张图是我减少上样量的图，前几道为12.5ul ,后两道为10ul，是否上样量还应减少呢，因为带中还有凹陷，谢谢指教。

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2014-7-5 21:22

42006580.jpg (31.2 KB)

XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

想请教一下，你的图示拿什么仪器照的相啊？还是拿扫描仪扫描的啊？呵呵，条带看得蛮清楚的！

finger[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

上样量太大了，主要是上样体积太大。10ul就足够了。

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如果上样量减少，是否表达蛋白的带也会相应变细，这两张图是我减少上样量的图，前几道为12.5ul ,后两道为10ul，是否上样量还应减少呢，因为带中还有凹陷，谢谢指教。

zbboom[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我这是用我们的柯达的凝胶成像仪扫的胶

tie8[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有凹陷，原因估计就是梳子底部不平，或者加样是中间凹陷了
另外和样品的浓度和电压也有关系，象这样大的浓度，电压小一点也许会平整一点，不过这和胶的浓度也配合的
呵，反正不影响结果的！胶跑的不错，是ecoli重组蛋白的样品？
胶确实拍的很棒，有钱就是好呀，买磕打的:p

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