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标题:【求助】为何我的SDS-PAGE加样接通电源后样本在原地不动呢？

langlang[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为何我的SDS-PAGE加样接通电源后样本在原地不动呢？


郁闷！第一次配胶，好不容易配成了，可是加样接通电源后为何样品一直在原地不动呢？正负极是对的
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greenbee[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

下面的封胶条是不是忘记取下来了?
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langlang[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的配胶工具不需要封胶条的，还可能是什么问题呢
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

确定仪器没问题的话看看配的溶液
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前做也遇到这样的情况,综合有一下的原因:
(1)加样接通电源后,你是否检查过在铂金丝的四周有气泡产生,如果没有说明没有 电流的通过,检查仪器、接线看那里出现了问题。
（2）制样的问题：你制的样可能浓度过高，相互胶连在一起，无法正常的泳动；或者杂质太多将胶孔给堵住了，样品无法泳动。
（3）溶液的配制。我曾经偷懒用别人的电极缓冲液去做电泳，结果跑了2小时不走1cm，郁闷。用多了或配错了的电极缓冲液可能出现无法正常泳动。
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duoduo[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
郁闷！第一次配胶，好不容易配成了，可是加样接通电源后为何样品一直在原地不动呢？正负极是对的

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提供的信息太少了，电泳仪显示的电流、电压是多少呢？接通后电泳槽里面的缓冲液是否有上升的气泡？波片有没有夹紧？缓冲液有没有淹没到梳子的位置？
好好检查一下在跑
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ha111[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能是仪器的问题
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发表于 2014-7-5 21:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不是仪器问题，别人用同样的仪器跑成了。我检查了各种缓冲液，pH有问题，今晚一一重新配了，可是我的电泳缓冲液按照《分子克隆》第三版中所讲配制，5倍储存液1L Tris15.1g,甘氨酸94g，10％SDS50ml，称量误差在0.01g，可是测得pH为8.9,如果是pH计的问题，其他缓冲液都是用一个pH计测量的，依次推测，我的电泳是不是又会跑失败？该如何解决这个问题？三个pH值在SDS-PAGE中分量有多重？谢谢！心急如焚，后面还有很多事要做，在这里卡住了，郁闷！
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发表于 2014-7-5 21:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

30%（w/v）丙烯酰胺溶液
0.9g N,N,－甲叉双丙烯酰胺用少量双蒸水稍加热(36℃-37℃)溶解，再用此溶液溶解29.1g丙烯酰胺，然后用双蒸水定容至100ml，过滤，滤液装于棕色瓶内置于4℃冰箱中保存备用。
8、10%过硫酸铵
5.0g过硫酸铵用少量双蒸水溶解，定容至50ml然后分装于1ml离心管中，置于-20℃冰箱中保存备用。
9、分离胶缓冲液（PH8.8）
18.15g Tris溶于40.0ml双蒸水中，用浓盐酸调PH值至8.8，然后用双蒸水定容至100ml，置于4℃冰箱中保存备用。
10、浓缩胶缓冲液（PH6.6）
6.0g Tris溶于40.0ml双蒸水中，用浓盐酸调PH值至6.6，然后用双蒸水定容至100ml，置于4℃冰箱保存备用。
11、电极缓冲液（PH8.3）
3.0g Tris+14.4g甘氨酸+ 10ml 10% SDS溶液，用双蒸水溶解定容至1000ml，用浓盐酸调PH值至8.3，置于4℃冰箱保存备用。
我做SDS-PAGE电泳的配方,你可以借用一下,如果还不够的话,你可以在TAKARA的产品介绍目录后面找到更多的资料,包括了试剂的配制和不同浓度的胶的成分配比.
如果害怕PH计问题,可用试纸粗测一下啊!
圣诞老人给你一份惊喜了!
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am10[使用道具]
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发表于 2014-7-5 21:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

marker 跑的动么？
恒压跑还是恒流？如果恒压，电泳仪的电流示数如何？是否有电流？
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