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标题:【求助】关于2-d的定量问题

xevin[使用道具]
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发表于 2014-7-5 22:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于2-d的定量问题

在做2-d的IEF之前要对上样缓冲液进行蛋白的总量测定以确定上样的量，但我认为这种方法是没有必要的，而且还是不准确的（光谱仪测的误差太大了）。内参的存在完全可以矫正上样的误差。不知道我对不对请指教！谢谢
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standbyme[使用道具]
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发表于 2014-7-5 22:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们测光吸收值时用酶标仪,比光度计测定要准确.
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bring[使用道具]
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发表于 2014-7-5 22:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用酶标仪测光密度值做出来的定量也会有偏差,酶标仪测定值前后重复就会有相当偏差.
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-7-5 22:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

但是如果同时存在几个要比较的样本，要求上样量一致的话，不测浓度还有什么可以估算的方法呢？
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2014-7-5 22:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得还是要定量的
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nikonun[使用道具]
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发表于 2014-7-5 22:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们测蛋白浓度也是用酶标仪,但蛋白倍比稀释后测得的浓度不成直线.
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2014-7-5 22:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是做蛋白质组学的比较分析，保证上样一样多就可以了，我是这样做的2D,具体上样量定的也不是很准确，有一个大约值就可以了
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49888[使用道具]
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发表于 2014-7-5 22:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

作个标准曲线看看相关系数如何,对蛋白定量有一定参考意义的
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tudou85[使用道具]
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发表于 2014-7-5 22:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最好还是做一下蛋白质定量
因为你的提取总蛋白的时候，批次间的稳定性不一定会很好
如果需要进行蛋白质组差异分析的话，还是需要总上样量大致相同的
至于标准曲线不准确
我认为可能是由于操作过程和测定方法产生
不知道楼主用的什么试剂盒，我们用的是阿马西亚的定量试剂盒
首先它是有保质期的，其次我觉得操作中比较重要的是那一步离心产生
白色沉淀，注意离心管的摆放位置要一致，否则二次离心时可能将沉淀
带入上清中被弃去，
还有就是测量方法，我们比较是用分光光度计的，
以前试着用酶标仪，发现效果不是很好，怀疑是光程太短了
基本上我们做的标准曲线R2能有0.99。
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xevin[使用道具]
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发表于 2014-7-5 22:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得既然我们可以通过内参的选择来驱除样品的上样量的误差,为什么还要引入蛋白上样前的定量测量,况且这种测量的结果的准确性我不敢恭维!!!!!
是否可以抛弃着一步直接进行水化上样!
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