【求助】请教蛋白质浓缩问题

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标题:【求助】请教蛋白质浓缩问题

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发表于 2014-7-7 15:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

多肽需要浓缩至20mg/ml，但不想用超滤或聚乙二醇来浓缩，试过上离子柱直到过载后，用盐洗脱，但最大浓度也只能达到5mg/ml。有其它办法吗？

duoduo[使用道具]
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发表于 2014-7-7 15:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你有的是什么离子柱???载量多少?洗脱的最适pH是多少??

qianqin1977[使用道具]
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发表于 2014-7-7 15:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以采用冷冻干燥，不过好像比较费时，把样品放在大培养皿里，这样接触面积就比较大，能够干燥的快一些。
如果蛋白能够耐受较高一点的温度而不失活的话，可以采用减压蒸馏。

eric930[使用道具]
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发表于 2014-7-7 15:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以尝试用蔗糖进行浓缩，对你蛋白应该没有影响但你得选择合适的透析袋截留分子量尽量小比如3.5Kd或以下的

ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-7-7 15:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

离子交换柱层析浓缩浓缩效果很大程度上取决于填料对样品的容量，容量大浓缩效果会比较好。如果楼主样品冻干后复溶性好可以采用冻干方法进行，但很多蛋白多肽复溶性差冻干后复容可能有损失。另外，采用聚乙二醇浓缩也是一个浓缩途径，但要注意控制过程，因为此过程很容易造成蛋白浓度过饱和而析出。另外，楼主可以尝试一下超滤，采用millipore超滤管，如果楼主样品富裕，体积也比较大可以用超滤方法常用超滤装置有膜超滤和纤维管超滤等。不过这类超滤方法可能有比较大的损失。