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标题:【求助】大家帮忙来分析一下我的SDS-PAGE电泳图

douding66[使用道具]
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发表于 2014-7-7 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】大家帮忙来分析一下我的SDS-PAGE电泳图

目的分离蛋白约50KDa，上样量20，5＊loading buffer。我是用10％分离胶，5％浓缩胶。先是180V30min，然后300V 30min。Marker大小从下往上，44，66，97，116，200KDa。
SDS-PAGE是WB的基础，这是我第一次做SDS-PAGE，请多提改进建议。


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2014-7-7 15:53
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-7-7 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很凑和，胶不匀，还有是不是胶凝的时间比较短就跑电电泳了，我建议你配完胶后，多凝一段时间
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发表于 2014-7-7 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 fsdd817 于 2014-7-7 15:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

很凑和，胶不匀，还有是不是胶凝的时间比较短就跑电电泳了，我建议你配完胶后，多凝一段时间

怎么看灌胶的质量，我中间那条比较大的条带是凝胶造成的，还是蛋白条带
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发表于 2014-7-7 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你那个电压是不是有点太高了，我们通常都是90，120V
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-7-7 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不同的电泳仪所用的电压是不一样的，请先说明你电泳仪的型号。不过很明显，你的电压调的太高了，没烧了算你幸运。
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发表于 2014-7-7 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
电压大了吧，还有可能是梳子没插好或者孔底下被碰得不平了
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douding66[使用道具]
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发表于 2014-7-7 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是Bio-Rad Mini-Protean 165－3301
电泳条件是别人介绍的，我这次换成了120V，30Min，分离胶200V，40分钟
直接转膜了，还不知道效果怎么样
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-7-7 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的marker 走的很好，请问你定的是哪个试剂公司的
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douding66[使用道具]
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发表于 2014-7-7 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Marker是TaKaRa的，Lot：D531S
比较便宜的，180RMB，50Test
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glass[使用道具]
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发表于 2014-7-7 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分离胶的浓度是不是浓了点,因为Marker和蛋白样品总体上跑的比较靠近加样孔.另外,不知你用的是进口电泳槽还是国产的,如果是国产的,是不是灌胶后到胶完全凝固之前动了,或是拔梳子时动了胶,进口的好一些.SDS-PAGE利用的是分子筛,所以胶一定要灌好
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