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标题:【求助】如何来检测糖基化

yhz1973[使用道具]
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 小中大

【求助】如何来检测糖基化


我从2-D GEL上看到一系列点，很像是某个蛋白被糖基化修饰。我想请教如何来证明它们？！
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红茶可乐[使用道具]
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 小中大

生化书上糖蛋白染色方法
（1）步骤
1 固定： 10％三氯乙酸 60分钟
2 漂洗： 石英水 1分钟
3 漂洗： 石英水 1分钟
4 敏化： 1%高碘酸 60分钟
5 漂洗： 石英水 15分钟
6 漂洗： 石英水 15分钟
7 染色: Schiff试剂 60分钟
8 漂洗： 石英水 1分钟
9 显色： 0.25％偏重亚硫酸钠 3.5%乙酸 4℃过夜
10 漂洗： 石英水 糖蛋白显红色谱带
（2）配方
固定液： 三氯乙酸50ml，石英水450ml
敏化液： 高碘酸1ml，石英水定容至100ml 4℃避光保存
Schiff试剂 碱性品红：1.0g溶于蒸馏水200ml，偏重亚硫酸钠3.2g溶于蒸馏水200ml， 混合后加盐酸4.2ml，4℃搅拌过夜，加活性炭2.0g，振荡1min，过滤 显色液： 偏重亚硫酸钠1.25g，冰乙酸17.5ml， 石英水定容至500ml 室温
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yhz1973[使用道具]
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 小中大

石英水？怎么第一次听说
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yhz1973[使用道具]
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 小中大

另外，我这个蛋白本身就是糖蛋白阿
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红茶可乐[使用道具]
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 小中大

石英水就是双蒸水。你是要验证糖蛋白被糖基化？
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 小中大

用糖基化酶处理，做对照电泳，看有何变化。
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yhz1973[使用道具]
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 小中大
我想验证的是一个糖蛋白的糖基化。
糖基化酶？
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 小中大

应该是糖苷酶吧，用于切除糖基。
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 小中大
1.荧光染色检测方法:
丹磺酰肼作为酸性品红染料的荧光替代试剂可用来检测聚丙烯酰胺凝胶中的糖蛋白.
使用Pro-Q Emerald 300染色检测聚丙烯酰胺凝胶中的糖蛋白或PVDF膜上的糖蛋白.
2.与凝集素联用的染色检测方法
蛋白转到PVDF膜上,与结合了碱性磷酸酶酯酶的凝集素一起孵育,然后加入底物DDAO磷酸盐,生成红色荧光的DDAO来检测,灵敏度约为15ng,依赖于蛋白质的性质和糖基化程度.
3.其他
可用酶解或者化学裂解的方法将糖链从糖蛋白中释放出来,经过2氨基苯甲酸等标记,用毛细管电泳或高效液相色谱等分离,再用检测器检测或者用MS,NMR等方法检测.
大体检测思路如上,如果还有不明白的,建议多看外文文献.
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 小中大
glycobiology有两类酶，一种是glycosidase ,一种是glycosylransferase,两种作用刚刚相反，你如果分析糖基化形式，推荐你到expasy上面有网站可以参考
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