小中大凝胶层析我也常做，有几点文献和操作经验想在此分享一下：
一般凝胶层析上完样之后应用同种缓冲液同一流速洗柱床三个柱体积（如果确定样品中的杂质全都洗出的话可以适当减少），这样可以避免改变流速后凝胶压力变大，穿入凝胶颗粒中的小分子蛋白无法穿出，因而污染了柱床的缺点。 还有在凝胶柱反复用过几次后应该重装一次，最好能用注射水煮沸除气泡，这样还可以将在使用过程中压碎的颗粒（煮沸冷却静置一段时间后明显悬浮不沉的颗粒物）去除，增加层析柱效。 用0.5M NaOH流洗柱床可以溶解沉淀在柱上的杂质。如果样品需要除热源，用0.5M NaOH就更合适不过了。 另外建议你将所用的缓冲液过滤一下，除菌过滤更好，最起码要将试剂中的杂质除去，可以更好地延长柱子使用寿命。非常赞成版主反洗的策略，因为凝胶层析柱较长，大的杂质在凝胶上层，反洗更合适。还有为了利用一般底部装填介质最匀，直接从底部上样的做法呢。
