【求助】WESTERN BLOT 试剂问题

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标题:【求助】WESTERN BLOT 试剂问题

ero11[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位战友,我想问一下,30%的聚丙烯酰氨、TRIS碱、10%SDS等配好后可保存多长时间，时间长的话会影响浓缩效果吗

yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵◎很长时间
我用了半年都没问题

uaubc[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

30%的聚丙烯酰氨:丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸，这一脱氨基反应是光催化或碱催化的，故应核实溶液的pH值不超过7.0。这一溶液置棕色瓶中贮存于室温(室温避光保存)，每隔几个月须重新配制。
TRIS:高温灭菌后室温下保存,最好定期检查其PH值。不然会影响凝胶的PH值。
10%SDS：室温下保存，一定不要放在冰箱里啊，会结晶的。如果室温比较低，有结晶的话，可以水浴溶解结晶后再用。个人认为只要该液体不浑浊，都是可以一直用的。

ero11[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵,谢谢两位啊,可不知为什么,怎么我的样品一直不能很好的压缩呢,跑胶时样品带很宽

jkobn[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以从以下几方面考虑：
1、电泳缓冲液使用时间过长，其离子强度增加，影响电泳。这个可能性比较大，我的电泳缓冲液用了3次左右就会出现条带弥散的情况。新配置的就很好。
2、电压太低，使样品弥散。使电压维持在100-200V范围内进行电泳较适宜。
3、没有选用合适浓度的凝胶，大分子的蛋白在小孔径的凝胶里当然跑不开。
4、浓缩胶的长度或配比不对，样品没有很好的浓缩。

水母[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

求助：作了好几次免疫印迹，只跑出了marker,不知什么原因。蛋白的浓度因该在1mg/ml左右，胶的配置也应该没有问题。郁闷。

gogo[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

大家做tricine-sds-page 时，各层胶凝聚都需要多长时间？

kuohao17[使用道具]
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