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标题:【求助】如何简单方便地测定蛋白质含量,急!

jujuba[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】如何简单方便地测定蛋白质含量,急!


我用分光光度计测组织匀浆的蛋白含量,可是好象我们实验室分光光度计太敏感了,每次的读数相差都很大,真是把我搞晕了
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们试验室一般都是测细胞总蛋白,也是用分光光度计,读数较稳定,标曲相关系数>99.5%,ACtin均一,你考虑下是否是你的测蛋白的试剂盒不好?你的标曲怎么样?
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用的是什么方法，考马斯亮蓝法吗？该法试剂不佳时结果很糟，比色杯黏附染液。
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jujuba[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我没有用试剂盒,我用的是紫外分光测定法,
A1%1cm＝13.8（IgG）(280nm)
A1%1cm＝14.5(IgM)(280nm)
蛋白质浓度（mg/ml）=1.45OD280－0.74OD260
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的测量是不是超出量程了啊？？
用OD260-280测量，测量值在0.5~2.5左右为正常范围（我用 beckman du 530)
你的机器量程是多少？？最好稀释再测量。
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

紫外分光机测前预热1小时。
这是最简单的方法。
结果会稳定些。
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jujuba[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢，我的血清蛋白定量大约在20左右，我再测一下试试吧
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glass[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这里是cells 战友提供的各种方法的优缺点，您可以根据需要进行选择
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=747153&sty=3&keywords=%B5%B0%B0%D7%D6%CA%B6%A8%C1%BF')
以上方法我都有收集，如有需要请留言Smile
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xyw5[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可以试试 用BCA试剂盒
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用考马斯亮蓝最好，最准了。可以买带标准含量蛋白的，不用做曲线，只要把你的目的蛋白稀释到跟标准蛋白大致的含量（1g/L左右）即可根据公式：目的蛋白浓度=目的蛋白的OD值/标准蛋白OD值*标准蛋白的浓度求出。
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