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标题:【求助】SDS蛋白质电泳条带为什么老是歪啊?

rxcc33[使用道具]
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发表于 2014-7-7 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS蛋白质电泳条带为什么老是歪啊?


最近做SDS蛋白质电泳,做了两次,条带老是跑歪,而且我发现四个样四条带,越靠近胶的两端的带歪得越厉害,真是不知道是什么原因,不知道哪位能解释一下?另外不知道各位做蛋白质电泳一般要走多长时间,我做蛋白质电泳耗时非常长,条带光在浓缩胶中就差不多走了6个小时,总觉得不太对劲,不知道这种情况是否正常,哪位高手也顺便解释一下,谢谢了!
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-7-7 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

条带的歪斜和上样量有一定关系，各个泳道上样量不一致可能导致条带的歪斜。再就是看看你的电泳缓冲液是否时间长了，一般电泳缓冲液用3~5次就要换新的。
凝胶的配置要注意pH值和混合均匀，如果胶不均匀，也会影响条带。
从你后面的描述中，感觉你的电泳缓冲液可能有问题（缓冲能力不够）。跑胶的时间太长了，我一般跑胶2~2.5小时。查查电泳缓冲液的pH值。
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rxcc33[使用道具]
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 小中大

谢谢！电泳缓冲液用的时间确实比较长，可是跑胶的时候从电流表上看电压在120v时候，电流大概在60mA左右，不知道这个数值正常不正常？
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2014-7-7 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人愚见：
恒流跑比较合理。
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发表于 2014-7-7 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一点点分析及建议：
1.首先我认为胶跑歪的主要原因还是胶的问题：可能你在灌胶前没有混匀；你在灌胶的时候有漏胶现象，即使不漏胶，最边缘的两个泳道往往也可能会跑歪；还有就是温度的问题使你的胶凝的不匀。
2.个人认为上样量大可能会有此现象，但是主要导致的还是样品扩散或托尾。
3.你的电泳时间是有点长，这样会导致泳带变宽，甚至扩散。适当的调整电压或电流，缩短电泳时间。
4.bio-rad mini 小胶一般1h，六一的大胶为3h左右。
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发表于 2014-7-7 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对，我觉得如果两边有漏胶的情况的话，往往就会跑歪．　
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发表于 2014-7-7 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Lanes become distorted if the samples sit in the wells for too long before running.
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yysr238[使用道具]
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发表于 2014-7-7 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

以前我也用sds－page胶来跑，条带也是歪歪斜斜，经过多次改进总是得不到非常好的条带，向实验室的其他师兄咨询后也有同样问题，后来改用tricine胶后，上述情况就没了，而且条带很直，dolphine可以跑一块tricine胶来看看（我的蛋白分子量42kd）。祝好运！
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发表于 2014-7-7 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

条带歪的原因及改进
1 可能是你的样品含盐等杂质，需要去除
2 你的胶配的或凝得不均匀
3 你得电泳缓冲液可能配错（我们试验室有人曾出现过）或用太多次离子浓度已经变了
4对胶两边两个泳道，条带歪很常见，我们通常不用这两个并且电泳时只加入一些上样缓冲液（溴酚蓝），可以防止更内侧的条带跑歪。
希望有用！
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