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标题:【求助】SDS-PAGE 上样Buffer

chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-7-7 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE 上样Buffer

最近配2倍的上样buffer时,觉得颜色不对
请各位帮忙看一下哪里有问题
10ml: 2ml甘油,2.5ml浓缩胶buffer,0.025g嗅酚蓝,2ml10%SDS,加双蒸水至10ml,
还有别的配方吗?
多谢!
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DNA[使用道具]
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发表于 2014-7-7 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

2 × SDS-PAGE Sample/Loading Buffer
120 mM Tris-Cl pH6.8, 20% Glycerol, 4% SDS, 3% β-mercaptoethanol, 0.02% bromophenol blue。
−20ºC冻存或4ºC。用于SDS-PAGE电泳时的蛋白样品制备和上样。用时1:1与蛋白样品混合，95ºC 5 min变性蛋白后直接上样。
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chuntian1983[使用道具]
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 小中大

我感觉自己配的2 × SDS-PAGE Buffer不象是那种兰色
而是兰得偏红的颜色.不晓得是什么原因
10ml体系中我加了0.5ml的β-mercaptoethanol
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-7-7 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
颜色偏红是ph值的问题，应该将ph值增高一点就变蓝了。
我用的配方是：
10ml 甘油,
0.606gTris-Cl pH6.8
0.1g溴酚蓝,
0.2gSDS,
加双蒸水至50ml
（ 溴酚蓝的量可以减少一倍，对实验影响。）
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chuntian1983[使用道具]
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 小中大
多谢
是你最后把PH值调到了6.8吗
那β-mercaptoethanol
是不是在你上样的时候才加的呢
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-7-7 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是10ml:
0.5mol/L Tris-HCl(pH6.8) 1.0 ml
甘油 1.0ml
20%SDS(w/v) 1.0ml
β-巯基乙醇 0.5ml
0.1%溴酚蓝（w/v） 0.25ml
双蒸水 6.25ml
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-7-7 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

My 2XSDS sample bffer配方是：
2.4 ml 0.5mol/L Tris-HCl(pH6.8)
4 ml 10% SDS
2ml 甘油
0.5ml 0.5% 溴酚蓝
0.1 ml 双蒸水
β-mercaptoethanol
必须在水浴之前新鲜加入， 终浓度是10%
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阿k[使用道具]
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发表于 2014-7-7 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

pH偏酸会对颜色有所改变,在样品中加入一点(drop)1M Tris.HCl pH 7.0 就可以了.
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