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标题:【求助】请问分子量170的胶浓度

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发表于 2014-7-7 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请问分子量170的胶浓度

我的目的蛋白的分子量是170，做WESTERN-BOLT总是跑不好，条带特难看，要么就是没有条带，乱乱的一片，我用的是10％的分离，5％的集成
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-7-7 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你这个170的分子量分离胶应该用15%的,浓缩胶没问题.
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发表于 2014-7-7 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

12%就可以,5%的浓缩胶. 我跑电泳170KD的Marker很清楚.再不行可以延长电泳时间.
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发表于 2014-7-7 17:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢各位了，有一疑问不是说分子量大的蛋白，应该用浓度小的分离胶吗，这样地话，它才可以跑的快吗
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zsxan1990[使用道具]
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 小中大

现在一般都跑还原或非还原SDS-PAGE，170kd的蛋白要看你的蛋白的亚基的分子大小了，如果你的亚基分子量不高于50Kd，15％的分离胶完全没有问题，只要你的电压和时间掌握好。如果你的亚基分子量于50Kd，你的分离胶用10％没有问题，由于你的蛋白分子量为170Kd，所以你的亚基也不可能太大。当然浓缩胶用5％的就行。
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发表于 2014-7-7 17:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上地说得很对，应该看亚基的大小和组成，CV 100V 2-3hours
顺便请教，还原和非还原的在实验设计上有什么区别，结果上呢？
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发表于 2014-7-7 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
要根据自己的跑电泳目的采用还原或非还原系统：
1.一般非还原SDS-PAGE就是在样品处理液中不含有巯基乙醇等降解二硫键的还原性物质。一般应用于看样品中是否含有二聚体或多聚体，可以从电泳扫描后分析纯度、分子量等。
2.还原的显而易见样品处理液中含有还原性物质，一般用于看菌体目的表达、包含体含有目的蛋白量、诱导后鉴定菌种等
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发表于 2014-7-7 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白质技术手册上不是说170kd的适合用5％的分离胶么？
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白质技术手册上说170kd的适合用5％的分离胶，的确，但是SDS-PAGE走的是亚基的分子量，蛋白大部分是通过氢键的相互作用而形成其高级结构的，一般是由几个亚基折叠而成的，而SDS的存在可以破坏氢键，使高级构象被打成亚基的形式分子量就小了，该方法测定的是蛋白质的相对分子量，如果你的蛋白就是一种亚基，那电泳后应该就是一条带，象我的一个蛋白是200万的抗原，有三种亚基，电泳结果为3条带。蛋白质手册上的方法应该是测定蛋白的绝对分子量的，跑的是天然电泳，系统中没有使蛋白质变性的试剂和步骤。
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 小中大

多谢各位，还有一个问题，我在用10％的胶跑的时候，170带出现模糊一片，请问是什么原因呀
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