【求助】为何SDS-PAGE电泳条带不能完全跑开？（附电泳图）

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标题:【求助】为何SDS-PAGE电泳条带不能完全跑开？（附电泳图）

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

已经跑过很多次SDS-PAGE电泳了，之前都不错，但这两天跑的分子量低的部分（即凝胶下端）跑不开了，以前能看到第5条marker,现在第4条marker已经到最下面了,用的电泳槽和电泳时的电压完全一样，试剂也都换新配的，结果还是这样,请大家帮我分析以下吧,谢谢!
这是以前跑的,效果还行.

附件

2014-7-7 18:09

42837758.jpg (19.97 KB)

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这是现在跑的图,第4条marker下面的就基本看不到了,我后来把电泳时的电压减低到80V跑,结果也这样,最后换了电泳槽也不行,到底是和原因? 我要观察的目的蛋白一个是在第3条marker附近,一个在第4条的稍下方.
谢谢!

附件

2014-7-7 18:09

35447944.jpg (33.15 KB)

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我今天又跑了一个,让溴芬兰跑到一半就终止了电泳,但结果和上图一样,只是条带间距离更紧密一些,这个问题大家都没有见过吗?
只好自己顶一下了.

jujuba[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

小分子量的蛋白质是不容易跑好的，很容易糊掉，一下是我的建议：
1你在帖子上并没有说明你的SDS-PAGE电泳胶的浓度，建议用15%的，在不行就用18%的。这两个胶也不是很好跑，上样量不能大，建议做几个梯度。
2尝试用小肽电泳检测在第4条的稍下方的那个蛋白，电泳过程中使用60V的电压，可能要跑8小时以上。这个方法准能成功！
祝好运！

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用的是12%的胶，我把浓度升高实验一下，但以前我也是12%的胶啊，不明白了。

BOSS2011[使用道具]
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