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标题:【求助】蛋白裂解液出现沉淀

98776langtao[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白裂解液出现沉淀


我上个星期做好的蛋白裂解液，储存在－20度内，今天做电泳的时候发现里面有沉淀，不知道是为什么，对试验结果会不会有影响？望各位大侠赐教！Dead
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luoliqiong[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的裂解液配方是什么呀！
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duoduo[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
当然会有影响，蛋白沉淀出来了损失了，跑电泳只能说明溶解的蛋白情况。可能是裂解液的ph或离子强度等不适合你的样品，所以蛋白沉淀出来。不知道你的具体情况是什么，详细点大家好分析。
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，我想楼上的可能理解错楼主的意思了，楼主应该是说裂解液里有沉淀吧，不是蛋白样品里有沉淀。
目前常用的蛋白裂解液多有尿素的，配好冻存再融解的时候会看到一些白色的“沉淀”，应该振荡一下就会溶了。
楼主你说清楚一些吧，裂解液配方是怎样的，大家也好帮你分析。
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的裂解液配方是：
50mM Na2HPO4
1mM Na4P2O7-10H2O
20mM NaF
2mM EDTA
2mM EGTA
1% Triton x-100
我前些日子又做了一次，除了背景比较高外没有太大影响。我打算重新离心一次取上清，看看有没有影响。
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的意思是蛋白样品里有沉淀！
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

温度低了，TritonX-100的溶解力减弱，盐和蛋白质析出。解决办法：将样品在手里或室温一会即可，如还不行，你可以再加一点点的溶解液。
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一般在室温放半个小时才用的，可是里面还是有絮状沉淀！
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是对细菌进行裂解吗？是不是菌体没有破碎好，大块的菌体蛋白粘集在一起阿？
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youyou99[使用道具]
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发表于 2014-7-7 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也遇到过这样的问题，我想可能是样品没有保存好。
后来我们再提取样品又没有出现这样的情况了
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