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标题:【求助】SDS-PAGE胶不凝?

linlinstar[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE胶不凝?


今天第一次配胶跑电泳
加了TEMED的,上个星期才领的
用了我配的和别人配的丙烯酰胺都不行
这是为什么啊~~~~
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Maybe your APS have some problems.
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linlinstar[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

10%的过硫酸铵也是刚配的啊~~~
看来我要重配一下咯?
-_-"
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

ap和temed都加了多少呢？
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发表于 2014-7-8 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

影响SDS-PAGE胶凝固的主要因素有两个：一个是加入的TEMED质和量，另一个就是温度。配方没错的话，不知你做的时候是否室温较低，建议你试试30°保温十分钟，应该会促进凝结。
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standbyme[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我不太同意summerxx的说法，30度保温的话有可能你配的胶出现气泡，分离胶凝结的时候会释放一定热量，换句话说，15%的分离较要比10%的分离胶释放出更多的热，如果你温度太高，凝结太快，就会出现气泡，有人用提高APS和TMEMD的浓度的方法来省却分离胶除气这一步，但是APS和TMEMD的浓度不能太高就是因为太高的话凝结加速，产生的热容易有气泡。如果楼主的分离胶不凝，从各个试剂找找问题吧，建议你按照分子克隆书上的配方配胶，我实验过好多次，没有问题。没有必要更改配方。
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linlinstar[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是按照分子克隆的配方配的
昨天重庆7-9度吧
我把胶室温放了1h
一点凝的迹象都没有：（
后来试着在37度孵箱里放了30min
居然还没有凝！
可能真的是哪个试剂出了问题
我的东西都是上周配的
莫非哪个地方马虎了？
-_-"
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summerxx[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵 谢谢楼上的指教，不过我这可能因为气候影响，SDS-PAGE本来以前很好用的，但是现在经常出现不凝结的现象。我就给它放在了40°烘箱里保温了，实践的效果不错，蛋白条带很规则，未出现气泡影响，嘿嘿，太侥幸了。不过应该本着科学严谨的态度来对待试验的，谢谢。
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c86v[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我倒是觉得有可能加完TEMED 和APS后没有充分混匀的原因，我们实验室全都是做完分离胶后用水封上然后放于37度烘半个小时，气泡之类的现象很少
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也出现过你的这种现象,当时我把TEMED的 量从4提到了6,结果还不错,也没有出先气泡之类的,也许你可以试试
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