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标题:【求助】我的蛋白质样品在扩散,能帮帮忙吗?

Ao7[使用道具]
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【求助】我的蛋白质样品在扩散,能帮帮忙吗?


我现在在做SS-PAGE,好不容易做好胶了,但是在跑电泳时,样品在浓缩胶中出现样品从一个孔道向其他孔道扩散的现象,这种现象在上样时没有出现,而在样品进入浓缩胶后出现.这究竟是什么问题造成的,很郁闷呀
各位大侠帮帮出出注意,谢谢了.
是不是温度低,而导致胶不能均匀凝聚呢?
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样品内离子强度过大,导致扩散
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如果胶的浓度太低,会不会出现这种情况。
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不知道你所说的扩散是什么意思?我分析一下所谓扩散的原因吧!
1.首先这种现象是在你开始电泳时,就是说进入浓缩胶时,看见溴酚兰连成了一条线,这很正常的现象,由于溴酚兰分子量比较小,发生了扩散,因此正常情况下,被浓缩成一条线,如果你发现浓缩的不好,可能是电极缓冲液的问题,还有胶的问题,凝的不均或配制有错或试剂过期。
2.如果你在电泳后显色后才会发现样品扩散,这扩散就有很多种原因了。首先1)扩散发生在浓缩胶阶段:电极液、胶的配制、试剂是否有过期、盐浓度过高等,如果浓缩的效果,就是进入分离胶时溴酚兰呈一条线,可基本排除电极液。
2)扩散发生在分离胶阶段:也有电极液问题,按上述加以排除,浓缩胶凝的不均匀(温度影响值得关注)、试剂过期导致凝胶浓度过低,盐的浓度过大。
3)还有几个不可忽视的原因:你的上样量太大、你的电泳条件问题电流或电压太低、电泳时间太长、再有就是电泳后固定不当等。
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你胶放在什么地方凝固的,多长时间?
我们一般放在37C温箱,一个小时就差不多了,效果挺好。没凝固好的话是会出现这种问题的!
一般与胶的浓度没有关系,我曾做过浓缩胶2.5%的SDS-page,蛋白都没有扩散!所以不必担心。
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原因可能是分离胶凝聚好后用于液封的液体没吸干,导致两层胶之间有空隙,所以导致扩散。
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Ao7[使用道具]
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另外我还想问一下,我在提取蛋白质的时候用的是PEG沉淀蛋白质,但是沉淀后有PEG的残留,粘糊糊的,请问怎样把它去掉.谢谢了!!!
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聚乙二醇(PEG)有200,300,8000,10000,20000等不同分子量, 可以参考之后用透析法.
不过一般沉淀蛋白质可以用TCA法,除非有特殊情况不能用TCA的.
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上海丰核[使用道具]
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回复 #1 Ao7 的帖子

可以用透析法,. 不过一般沉淀蛋白质可以用TCA法,除非有特殊情况不能用TCA的.
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