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标题:【求助】sds-page上样的问题

superboy[使用道具]
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发表于 2014-7-8 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】sds-page上样的问题


请问：样品用枪注射进加样孔时，会往上飘，不会沉到孔内。
除了是样品糖分含量偏高之外，还有其他原因吗?如果是含糖量偏高，如何解决？
跟重复使用tri-gly电极缓冲液有没关系？
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-7-8 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你上样缓冲液中加甘油了吗，甘油可以使样品下沉的，我觉得跟重复使用缓冲液没有关系
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finger[使用道具]
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发表于 2014-7-8 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以先加电极缓冲液，再上样。如上述，样品稀释液中应含有甘油，使样品沉入孔底部。
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superboy[使用道具]
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发表于 2014-7-8 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的上样buffer里有加10%甘油的阿。
而且是先加tris-gly buffer然后才上样的。
表示不解。。。。
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-7-8 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请用25％甘油试试吧
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2014-7-8 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果你的loading buffer 配的没问题，则是操作不够细引起。建议最好用专门的加样器，它可以伸入加样泳道的底部，可最大限度的减少样品的上漂。如果你是用移液器，那 最好用10ul 的进口tip ，而且移液器质量须可靠，加样时，避免反复推压。少量的样品飘起可认为正常。
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发表于 2014-7-8 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得跟样品和电泳缓冲液无关。
不知道你的上样缓冲液是什么时候配的。如果是象这样的天气配的我想可能是甘油的量不够，因为甘油本身黏度就挺大的，现在天冷，我前几天用移液枪取甘油的时候感觉好像黏度更大了，不那么容易吸到位。配上样缓冲液的时候注意是否取了足量的甘油。用小量筒配制50%的甘油，在移取甘油的时候会更容易一些。
我加样不用移液枪，用的是50μl的微量进样器。微量进样器的针头很长，不好用，我就把针头用钳子钳短了的，长度正合适，很好用，在加样的时候把针头伸入孔底，一边加样一边针头跟随着上移，如果没有吸进气泡样品就没不会上漂。不过要注意的是，微量进样器可能是不同的，有些微量进样器不能钳短。有的微量进样器是只有空心注射管，推拉杆是实心的，没有内套一根实心细丝，这样的就可以钳短（如我的50μl微量进样器）；有的推拉杆是空心的，注射管和推拉杆中内套一根实心细丝，这样的不要钳它（唉，我那可怜的5μl微量进样器啊~~~~）。
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-7-8 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Last time, I found that my samples after lysis and sonication could not go into the
wells easily, they just come out to the top of the buffer.
But for my samples, the problem is that a lot of DNA is there after lysis and
sonication.
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loli[使用道具]
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 小中大

Last time, I found that my samples after lysis and sonication could not go into the
wells easily, they just come out to the top of the buffer.
But for my samples, the problem is that a lot of DNA is there after lysis and
sonication.
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2014-7-8 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

就是甘油少了！
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