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标题:【求助】关于SDS丙烯酰胺电泳的问题

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【求助】关于SDS丙烯酰胺电泳的问题


各位前辈老师们,我是刚毕业的学生,现在在做SDS电泳,之前也不断的出现过许多问题,但是从丁香园的帖子里学到很多知识,把问题一个一个都解决了,可是最近出现了一个问题,我改变了几乎所有可以改变的条件后问题仍然没有得到解决,所以我来到这里,希望可以有前辈老师或者高人给我一些指导和意见,帮助我早日解决这一问题!我现在跑的电泳是浓缩胶50V 30分钟,分离胶120V至电泳结束,其它都是按书上要求的做的,现在问题是我跑完的胶只能看到25万的那条蛋白条带,18.4W的那条带就几乎正好和溴酚蓝重合了,几乎看不到,而我们最需要看到的14.4W的那条带就完全看不到了。其实以前我跑分离胶用的是150V的电压,现在改成120V了也还是看不到14.4的蛋白条带!下面我附上的图前面2张是之前在这里工作的师姐跑的电泳图,她跑的很漂亮14.4W那条可以很清楚地看见,而后面两张图是我最近跑的电泳图,就只可以看到18.4W的那条。希望前辈高人们可以给我点指导,提点意见!


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8princess8[使用道具]
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建议分离胶浓度加大一些,另外可以先用预染Marker走一次,只要相应的Marker条带跑开了,掌握好电压及时间再用你这个Marker跑一次,应当差不多了。
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胶的浓度低了,下面的小分子量蛋白聚在一起,比较一下上下两块胶marker最下面的2条带即可看出来。
要增加胶的浓度。
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shenkunjie[使用道具]
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我的同学采用的是19:1的聚丙烯酰胺来跑低分子量的蛋白。他的蛋白大概是9KD!不知道这个信息对你是否有用。
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分离胶浓度提高,电泳时间不要过长。
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原帖由 8princess8 于 2014-7-8 15:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

建议分离胶浓度加大一些,另外可以先用预染Marker走一次,只要相应的Marker条带跑开了,掌握好电压及时间再用你这个Marker跑一次,应当差不多了。

真的实在是太感谢你了 等周一回去上班我就照您说的方法试试看 谢谢您的帮助和指导!!
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QUOTE:
原帖由 DONT 于 2014-7-8 15:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

胶的浓度低了,下面的小分子量蛋白聚在一起,比较一下上下两块胶marker最下面的2条带即可看出来。
要增加胶的浓度。

首先真的很感谢你 其次 觉得您说的很有道理 我会按您说的做适当改变的 万分感谢
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原帖由 shenkunjie 于 2014-7-8 15:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我的同学采用的是19:1的聚丙烯酰胺来跑低分子量的蛋白。他的蛋白大概是9KD!不知道这个信息对你是否有用。

谢谢您的意见 我会按您说的把丙烯酰胺的浓度做适当改变试试看的 您的信息对我很有用 再次感谢
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原帖由 6327555 于 2014-7-8 15:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

分离胶浓度提高,电泳时间不要过长。

恩恩 好的 感谢您 我会按您的意见适当改变实验条件 再重新做实验的 很感谢您
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