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标题:【求助】35、120、150kd的目的蛋白可以一起跑Western吗

yes4[使用道具]
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发表于 2014-7-8 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】35、120、150kd的目的蛋白可以一起跑Western吗


我的目的蛋白分子量分别是35、120、150kd，内参用的是βactin（43kd），这能一起跑吗？要是可以一起跑的话，分离胶应该配多少的呢？转膜过程有什么要特别注意的吗？貌似大分子量蛋白转膜液中要加一定的SDS，想这些一起跑，那么转膜时不加SDS可以吗？
哪位大神能指点一下，多谢多谢了！
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-7-8 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以放在一个电泳槽子里跑。但是要求胶的厚度一样。分离胶35kd和内参10％的胶，其他的两个8％胶。浓缩胶5％的胶就可以了。跑吧祝实验顺利
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发表于 2014-7-8 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知是湿转还是半干转。半干转条件我做过。做的很好。
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-7-8 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 redbutterfly 于 2014-7-8 16:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

可以放在一个电泳槽子里跑。但是要求胶的厚度一样。分离胶35kd和内参10％的胶，其他的两个8％胶。浓缩胶5％的胶就可以了。跑吧祝实验顺利

谢谢！但是35kd和43kd(内参)一起跑能跑的开吗？切胶不好切啊~他们几个一起8%的胶跑不行吗？
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-7-8 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 redbutterfly 于 2014-7-8 16:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不知是湿转还是半干转。半干转条件我做过。做的很好。

什么是干转？什么是湿转？抱歉啊，我们这边的实验室大家用的转膜方法貌似都一样！你这个半干转我百度一下适用于小分子量，你具体条件及步骤能告知下吗？多谢多谢！
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发表于 2014-7-8 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. 半干转转膜槽是个平板，只要很少的转膜液；湿转槽是近似立方体盒子，要几百毫升转膜液。
2. SDS一定要加，查转膜液配方可见用量。
3. 可以一张膜搞定。有配梯度胶的工具配梯度胶。没有的话分离胶浓度稍作下手脚：12%的胶灌玻板高度的一半，再直接小心加8%的胶，液封后灌4%浓缩胶。
4. 转膜时大小蛋白的切了分开转。小的转膜时间短，大的长一些。转完后丽春红S染色看效果
5. 35、43kd跑的开，干嘛一定要把它们切开啊？敷完目的蛋白抗体ECL显影拿到结果后，再敷内参，再曝一次光就行。
祝好运！~
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-7-8 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主估计理解错误了！我是说。四块板一起跑电泳。而不是一块胶能切这么多的目的蛋白
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