【分享帖】苏丹红测试小插曲：都是标准惹得祸

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标题:【分享帖】苏丹红测试小插曲：都是标准惹得祸

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发表于 2014-7-15 17:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

苏丹红测试小插曲：都是标准惹得祸

序

源于目前的热点话题---食品安全，实验室拟开展食品中苏丹红Ⅰ—Ⅳ的检测工作，标样的请购已经是半年前的事情，

因为计划不如变化快，诸多临时情况需要及时处理，因此开展此项目已经是标样到货的半年后。

拟开始项目工作前，首先着手试剂、标样的准备工作，一切就绪后，就开始具体实验部分。

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发表于 2014-7-15 17:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

正文

1、首先是标准溶液的配制  参照国标GB/T 19681-2005食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法中标准溶液的配置方法进行配置：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ各10mg，用乙醚溶解后再用正己烷定容至250ml。根据此标准介绍的方法，我们首先配制各种物质的单独贮备液，然后再根据实际需要各吸取适量标准贮备液或混合，用正己烷定容，配制成相应的标准供试液和标准混合液，摇匀，待测。

2、上机测试：色谱条件

色谱柱：Ultimate XB-C18，4.6mm*250mm，5μm，月旭材料科技（上海）提供，或性能相当者；

流量： 1.0ml/min；    柱温： 30℃；

检测仪器：高效液相色谱仪，江苏天瑞仪器股份有限公司；

检测波长： 500nm；进样量：10ul；

流动相A：  0.1%甲酸的水溶液:乙腈=85：15；

流动相B：  0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20；

梯度模式如表1所示：

表1.梯度模式
时间/min
0
10
25
32
35
流动相A比例/%
25
25
0
0
25
流动相B比例/%
75
75
100
100
75

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发表于 2014-7-15 17:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先进行单峰定性，以图说明：

图1为苏丹红Ⅰ在此色谱条件下的色谱图：

图1：苏丹红Ⅰ标准色谱图

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2014-7-15 17:56

201112150949309120.jpg (22.67 KB)

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小中大

图2为苏丹红Ⅱ在此色谱条件下的色谱图：

图2：苏丹红Ⅱ标准色谱图

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2014-7-15 17:56

201112150951051291.jpg (22.79 KB)

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发表于 2014-7-15 17:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

图3为苏丹红Ⅲ在此色谱条件下的色谱图：

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2014-7-15 17:57

201112150951274260.jpg (24.01 KB)

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小中大

图4为苏丹红Ⅳ在此色谱条件下的色谱图：

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2014-7-15 17:57

201112150951441002.jpg (21.85 KB)

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发表于 2014-7-15 17:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

通过对各个物质的单标溶液进行定性的时候，问题出来了，苏丹红Ⅲ在此色谱条件下出现了两个大峰，这种情况我还是第一次碰到，然后我们查到当时购买的标样证书，此标样是上海百灵威提供的美国Accustandard，Inc.公司产品，Catalog No

YE-022N，CAS#:85-86-9，Lot：15547，purity%：100（GC/MS），当时看到这个标准品证书的时候，我们并没有首先怀疑是标样的问题，但是我们试着改变了好几种色谱条件，溶解溶剂，始终是同样的现象：苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ都是出一个单峰，而苏丹红Ⅲ出两个大峰，这使我们没法定性，同时我们也参考了不同的文献资料，通过对其性质的了解，四个物质的性质有相似的地方，出峰情况也应该是相似的。当时因为项目是有时间计划的，于是我开始想办法解决此问题，于是找到了上海一家单位，当时也正做此项目，从他们实验室分给我少许苏丹红Ⅲ的标准物质，当时她们购买的是阿拉丁产品，纯度≥96%（HPLC），于是很快就有了新的标样，我们又开始着手新的标准溶液的配制，图5是阿拉丁产品苏丹红Ⅲ在此色谱条件下的色谱图（此处使用了安捷伦的LC1200进行测试，因为当时LC310在做其他的实验）：

附件

2014-7-15 17:58

201112150953037081.jpg (14.56 KB)

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发表于 2014-7-15 17:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

与此同时，我们也进样之前的Accustandard,Inc.苏丹红Ⅲ标准溶液，色谱图如图6：

附件

2014-7-15 17:58

201112150953229461.jpg (15.94 KB)

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发表于 2014-7-15 17:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

奇迹出现了，原来问题真的出在标样本身，于是在接下来的项目里，一方面我们用阿拉丁的苏丹红Ⅲ和Accustandard,Inc.的苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ标准物质进行后面的实验部分；另一方面我开始联系百灵威，将此情况反馈至美国工厂，此处暂告一段落。

3、标准物质的定性工作结束后，我们开始着手混标的重现性、线性等实验，在按照国标提供的标准贮备液和溶液的配制方法，从而配制的混标溶液进样后，重现性明显达不到国标的要求，而且苏丹红Ⅱ的峰形较差，拖尾因子0.80，理论板数3707，而其他三个理论板数均大于2万；与此同时，保留时间的重现性很差，连续进样6针的混标谱图叠加效果，以图7说明：

图7 ：重现性谱图

附件

2014-7-15 17:59

20111215095342858.jpg (41.13 KB)

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发表于 2014-7-15 17:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

通过查找原因，出峰时间一针比一针提前，根据配制的实际情况，因为配制时使用了乙醚，属于极易挥发溶液，导致出峰时间有所偏移，根据苏丹红物质本身的性质，在丙酮中的溶解性较好，于是我们重新配置标准溶液，以丙酮为溶剂，进行标准贮备液和标准混合溶液的配置，连续进样6针的效果比国标要好，以图8为真相说明：

图8：以丙酮为溶剂的混标谱图

附件

2014-7-15 17:59

201112150954032807.jpg (47.55 KB)

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