PCR仪

1. 应该在同一批跑比较好。这样可以消除仪器在两批之间的控制差异。当然这个必须保证目的基因与看家基因的运行程序是一样的时候。
2、没有意义。因为你不知道你加入的。做了看家基因之后即可以看到实验组和对照组中这个数目的比例。

===============================================================================================================

我说的delta Ct 指Ct（目的基因）-Ct（看家基因），这样不是就避免了“cDNA模板是否来自相同数目的细胞的RNA所反转录来的”这一问题吗？即delta Ct 是目的基因相对看家基因的值，然后比较病例组与对照组delta Ct的差异有无统计学意义（不用2-delta delta Ct 计算表达的相对倍数，我觉得非检验科的算出来没意义），这样不就可以说明两组表达有无变化吗？

您好！
我想请教你一下
DNA原始拷贝数的作用是什么呢
怎么通过它来建立与疾病的关系呢？
谢谢

=========================================================================================================

举个例子，可以测定血液中HBV DNA的拷贝数，这样就可以知道乙肝患者体内的HBV的浓度。
此外如果测定cDNA的时候，可以用来研究目的基因mRNA在正常样品和疾病样品中的表达差异，这样可以研究疾病与某个基因的关系。

ROX用来消除光程差，好像也有可能

不知道你从哪里看到需要先95度？图上的位置应该也不是95度。
这是我在程序运行的时候
instrument里面有个sample的温度，还有block的温度等信息
图上的位置为扩增45个循环后准备开始做融解曲线
此时sample 温度增为95度，持续10s
然后从60开始

还有几个问题，
Rn是什么意思
delta Rn又是什么，好像delta Rn的值是荧光量的lg值
还有，四个虑光片是什么作用
以哪个为准，总荧光和这又是什么关系

最近在用计算机程序模拟real-time的数据处理
不知道他是怎么通过检测的荧光值划出的扩增曲线
谢谢

============================================================================================================

有些仪器在做溶解曲线之前推荐先加热到95度，是让产物完全解链之后，然后降到60度后再重新结合，这样让产物双链尽可能结合。
之所以荧光值会升高，其实不是在95度的时候升高，而是到了60度的时候测定的荧光值升高了。具体是因为在扩增的时候测定荧光值都是在72度延伸之后测定荧光的。因为60度比72度低，60度的时候双链结合更加完全，这时候结合了更多的SYB GREEN I.因此荧光曲线上升。

Rn是第n个循环的荧光值，delta Rn你说的是正确的。
四个率光片，每个滤光片让一种荧光染料发出的荧光通过。如果你想在一管里头同时检测四种不同的模板DNA的数量，这样就可以用四种荧光染料标记的探针（taqman探针）来检测。一种探针对应检测一个模板DNA。一般没有人关注总荧光量。

扩增曲线是在第n个循环72度扩增之后测定荧光值作为Rn。然后将每一个循环的数据点连接起来就是扩增曲线了。

xiang1x wrote:
请问：
PCR效率的合理波动范围为？
谢谢！

================================================================================

这个具体的范围我还真不知道，应该没有一个明确的范围。但是越接近3。322说明扩增效率越接近2。