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标题:【讨论帖】定量PCR实验技术分享（解答定量问题）

wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2014-7-27 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把模板做梯度稀释，为什么原始浓度的Ct值比1/10稀释的Ct值还低？
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2014-7-27 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问：大家谁熟悉上海久盛生物技术有限公司啊？该公司的试剂盒质量如何？谢谢！
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lagua123[使用道具]
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发表于 2014-7-27 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问：大家谁熟悉上海久盛生物技术有限公司啊？该公司的试剂盒质量如何？谢谢！
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2014-7-27 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，我用质粒DNA做标准曲线，R^2值总是
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bring[使用道具]
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发表于 2014-7-27 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

thesthold的设置，
因为定量的基础是假设指数扩增期之前的扩增效率都是接近2的一个定值。所以设置thesthold一般设置在刚起跳不久，也就是比较接近于零的位置，软件有默认的thesthold，一般采用软件默认的就可以了。如果设得很高，这时候反应体系里头的一些资源已经处于短缺状态，扩增效率无法接近2。这时候就没有什么理论依据了。

是不是手动设置有几条基本原则：基线盖过所有阴性曲线，基线尽量位置最低，尽量位于曲线拐弯处？
为什么据此原则设置的基线与软件默认的不同呢？哪个更准确些？
多谢指教！
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发表于 2014-7-27 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把模板做梯度稀释，为什么原始浓度的Ct值比1/10稀释的Ct值还低？

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我觉得这是一个优化过程，不是模板越多CT值越靠前的，模板浓度太高会有抑制作用，使得荧光探针不能充分结合。
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-7-27 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问：为了节省金费，本人用了25ul反应体系，但在软件输入反应条件时却忘了更改（50ul）不知对实验结果是否会有影响？
谢谢！
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挖挖挖[使用道具]
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发表于 2014-7-27 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得这是一个优化过程，不是模板越多CT值越靠前的，模板浓度太高会有抑制作用，使得荧光探针不能充分结合。

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可是我前段时间做过浓度更大的样品，它的1/10稀释比这个样品的原始浓度还大，跑出了很低的Ct值，所以按理论，这个样品应该能得出对应的Ct值啊。
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挖挖挖[使用道具]
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发表于 2014-7-27 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可是我前段时间做过浓度更大的样品，它的1/10稀释比这个样品的原始浓度还大，跑出了很低的Ct值，所以按理论，这个样品应该能得出对应的Ct值啊。

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忘记问个问题，CT值低的意思是不是靠前，数值小
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挖挖挖[使用道具]
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发表于 2014-7-27 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把模板做梯度稀释，为什么原始浓度的Ct值比1/10稀释的Ct值还低？

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浓度越高，CT值本来就越小。
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