PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【讨论帖】引物质量直接影响PCR结果！

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 52  3/6 ‹‹123456››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【讨论帖】引物质量直接影响PCR结果！

wmp1234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79925
精华 0
积分 588
帖子 855
信誉分 100
可用分 5078
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
21

发表于 2014-7-29 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也常用生工的，出错一次，少一碱基，态度很好的得合了，呵呵，也是在济南。
宝生物错过一次，总P不出，仔细一看，特别粘，好象是PEG，做PAGE，发现根本没条带。这次在西安，找代理，说要检测，态度不好，于是我发火，威胁所有试剂都不付钱，马上答应重合成。
第一次在三博远志合成，结果和楼主相当，一半都有错，因是一同学作代理，不愿搞僵，便宜他们了，当然第一次也是最后一次让他们合成了。
顶部
daod[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76758
精华 0
积分 585
帖子 790
信誉分 100
可用分 4891
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
22

发表于 2014-7-29 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，今天刚给生工发了一个订单，58条引物，1342个碱基。
楼主大概是危言耸听吧。
顶部
whitesheep[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78856
精华 0
积分 825
帖子 1330
信誉分 100
可用分 7476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-4
状态 离线
23

发表于 2014-7-29 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在英俊合成也也有很多的错误！在哪里合成能保证质量呢？
顶部
98776langtao[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74068
精华 0
积分 275
帖子 290
信誉分 100
可用分 2191
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
24

发表于 2014-7-29 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
完全同意‘贰拾面体’ 朋友提出的上海生工引物合成质量没有保证。
我认为完全有可能
因为我就曾经在上海生工处合成过一对引物，目的片段看似扩增出来，但是连入质粒测序结果显示，在上下游引物的序列有多处错误，测序也是在该公司测定，引物合成错误不说，代理商竟然还要测序费，我实验所用的试剂，自己的宝贵时间该由谁负责！！！！，还好意思要测序费！！！！所以我就告诫师弟师妹绝对不要在上海生工合成引物！！！希望我的教训能给正在做实验或者即将做实验的朋友一点提醒，不要因为这些问题浪费我们的宝贵时间，毕竟我们要在有限的时间内，作出东西好毕业！！
顶部
小糖块[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76231
精华 0
积分 259
帖子 258
信誉分 100
可用分 2056
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
25

发表于 2014-7-29 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上海生工的引物是有问题的，我做了克隆一直不表达蛋白，后来一测，一端少了一的ATG的A，一端TAC的C变成了G，啊，我半年的时间就这样浪费了，因为引物合成时间较长，就没有和他们计较了，现在我们实验室都　不从上海生工订任何东东了，态度差，质量不行的公司能生存吗？
顶部
yonger[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74174
精华 0
积分 572
帖子 803
信誉分 100
可用分 4861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
26

发表于 2014-7-29 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上海生工的引物是有问题的，我做了克隆一直不表达蛋白，后来一测，一端少了一的ATG的A，一端TAC的C变成了G，啊，我半年的时间就这样浪费了，因为引物合成时间较长，就没有和他们计较了，现在我们实验室都　不从上海生工订任何东东了，态度差，质量不行的公司能生存吗？
顶部
yonger[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74174
精华 0
积分 572
帖子 803
信誉分 100
可用分 4861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
27

发表于 2014-7-29 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上海生工的引物是有问题的，我做了克隆一直不表达蛋白，后来一测，一端少了一的ATG的A，一端TAC的C变成了G，啊，我半年的时间就这样浪费了，因为引物合成时间较长，就没有和他们计较了，现在我们实验室都　不从上海生工订任何东东了，态度差，质量不行的公司能生存吗？
顶部
kuohao17[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77299
精华 0
积分 559
帖子 716
信誉分 101
可用分 4453
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
28

发表于 2014-7-29 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

02年时做实验用了一家公司的引物,花费了我2个多月时间,其他的各种资源耗费先放在一边不谈,关键是让带我的老师对我产生了不信任,认为我是要走的人了,不好好做实验了.事实完全不是这样的,当时我一心想把活干得漂漂亮亮,走的开开心心和心安理得.总之离开单位时总有一些别扭.之后换了个同学从新开始做,搭进去了3个月时间,但没有丝毫进展.再找遍所有可能出错的原因后,真凶浮出水面,就是引物合成出了差错,少了一个碱基.害人不浅,人力\物力\信誉,引物之毒害可见一斑.时间过去有将近5年了,这种歪风邪气依然横行,呜呼哀哉,让我辈甚感失望.看来这个市场不肃杀一批假冒伪略是不行的.

呼吁园子里的各位同仁坚决抵制和打压伪略产品的市场生存空间,让这个市场真正规范起来,借用一句广告词:大家好才是真的好.呼吁大家都出一份力,不让悲剧一次次的重新上演.
顶部
yhz1973[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79832
精华 0
积分 439
帖子 538
信誉分 100
可用分 3540
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
29

发表于 2014-7-29 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也出现过同样的引物错误，当时是在博亚，现在的英骏，不过出现问题后公司虽然重新合成，当时浪费了很多时间，这个是无法挽回的

希望公司能引起重视
如果事情大一点，公司肯定还会重视
记得上海的一个博士还做很多同位素，最后发现是引物问题，白白的被辐射了好几个月
顶部
zsxan1990[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76272
精华 0
积分 442
帖子 604
信誉分 100
可用分 3776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
30

发表于 2014-7-29 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
目前质量最有保障的方法是质谱检测，你可以清楚地看到你的引物中有多少有碱基缺失，多少有碱基错配。次一点的，可以选择毛细管电泳检测。
ecnusmmu，引物的浓度 和质量不能用琼脂糖电泳来检测（不知道你是不是这样检测的），因为琼脂糖EB染色检测的是双链DNA，只有在引物形成二级结构的情况下才能看到，所以不同引物形成二级结构数量不同，染色观察到的浓度就大不相同。
顶部
 52  3/6 ‹‹123456››