小中大结晶紫用甲醇配成0.5%浓度,使用时用1*PBS稀释成0.1%即可
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配制结晶紫浓度文献上提的0.1%好像多一点的,有在ddH2O或PBS里配的,也有在甲醇或乙醇里配的,在后二者中,结晶紫易于溶解,甲醇和乙醇都可以固定细胞用,二者无多大的区别(如果在ddH2O或PBS中,应该先用4%PFA固定细胞)。
结晶紫是用纯的甲醇(或乙醇)配成0.5%浓度(母液),用之前以1(母液):4.5(生理盐水)再配成染液(配好后避光可以存放24小时)。
以下是吉姆萨配方供参考:
将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油,在研钵内研磨30min以上,至看不见颗粒为止,再将全部(66mL)剩余甘油倒入,于56℃温箱内保温2h。然后再加入甲醇(66mL),搅匀后保存于棕色瓶中。母液配制后放入冰箱可长期保存,一般刚配制的母液染色效果欠佳,保存时间越长越好。临用时用pH 6.8的磷酸盐缓冲液稀释10倍。