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标题:【转载】【讨论】transwell肿瘤侵袭实验的吉姆萨(Giemsa)...

伊莎贝拉[使用道具]
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结晶紫用甲醇配成0.5%浓度,使用时用1*PBS稀释成0.1%即可

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配制结晶紫浓度文献上提的0.1%好像多一点的,有在ddH2O或PBS里配的,也有在甲醇或乙醇里配的,在后二者中,结晶紫易于溶解,甲醇和乙醇都可以固定细胞用,二者无多大的区别(如果在ddH2O或PBS中,应该先用4%PFA固定细胞)。
结晶紫是用纯的甲醇(或乙醇)配成0.5%浓度(母液),用之前以1(母液):4.5(生理盐水)再配成染液(配好后避光可以存放24小时)。
以下是吉姆萨配方供参考:
将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油,在研钵内研磨30min以上,至看不见颗粒为止,再将全部(66mL)剩余甘油倒入,于56℃温箱内保温2h。然后再加入甲醇(66mL),搅匀后保存于棕色瓶中。母液配制后放入冰箱可长期保存,一般刚配制的母液染色效果欠佳,保存时间越长越好。临用时用pH 6.8的磷酸盐缓冲液稀释10倍。
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redbutterfly[使用道具]
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你这个说法太搞笑了,一个小孔擦细胞会有那么难么?看上去你做transwell实验还是很少,不同细胞形态是不一样的,有些细胞转移能力强,并且呈现间质细胞形态的,穿到底层就是铺展开的。另外,transwell时间长短不一样也会略有差别。再者,一般transwell照相都是照insert中央部分,擦不干净的地方大部分只是边缘区域。
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yjf1026[使用道具]
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楼主你好,我想请教一下你是不是用matrigel包被小室的啊?我用的是BD的,但是稀释倍数应该是多少结果会比较好呢?有的说要1:5稀释,但是我这样尝试发现matrigel不凝固。楼主的照片效果很好呢,所以我想请教一下。
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junhun[使用道具]
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楼主,我想问下你PBS淋洗是用什么工具淋洗的,还有固定的话,用甲醛也是可以的吧?我是用PBS拿枪头吸取的PBS冲洗的,会把细胞冲掉么?我做的transwell中间没有细胞只有四周有,不知道是不是把细胞冲掉的缘故。还请您为我指点迷津!谢谢
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gemei0115[使用道具]
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BD基质胶1:7稀释较好,可以试一试
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89tongzijun[使用道具]
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BD基质胶1:7稀释较好,可以试一试
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lixi559[使用道具]
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楼上的那张Transwell片子,个人认为不是很好,虽然细胞显示很清楚,但是不典型,很有可能是穿没穿过去的细胞都被染色了,而且细胞密度偏大。
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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先固定在擦洗掉上室细胞完全可行!只是有时候小室边缘比较难擦!
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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1:4稀释的时候Matrigel会不会过湿?
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