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标题:【转帖】【求助】血管平滑肌细胞培养

douding66[使用道具]
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发表于 2014-8-2 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好,我是平滑肌细胞培养的新手,我严格按照书上写的做,和你做的也差不多,细胞就是长不出来啊.和你做的不同之处就是:我用PBS液清洗外膜.我用镊子头刮的血管内膜,我的困惑就是用一次性塑料瓶就是不知道怎么铺匀,因为做了几次用滴管铺的发现把瓶底磨毛了.现在都是徒手摇匀的.但是不是很匀.
我用玻璃瓶养但听说不容易长.铺匀倒是没问题.
目前有一瓶是第6天了,细胞倒是长出来了,就是很少啊,就零星几颗,我是怕细胞长不满啊.
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发表于 2014-8-2 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问，酶消化法什么时候换液比较好？
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Ao7[使用道具]
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发表于 2014-8-2 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问,有人做小鼠SMC吗,我做小鼠的肠系膜上动脉SMC,现在能够张出细胞,但是细胞生长很慢,2个月后才能到大瓶水平(7代左右),而且对epinephrine,angiotensin等刺激在calcium和myosin light chain phosphorylation上没有反应. a-actin染色阳性还是比较高的.
(个人感觉细胞的形态千差万别,圆形的索性的网状的,在不同的代数能见倒不同的类型,所谓波峰波谷也只有在细胞张的很满的时候,加上自己的想像才能看见T0T)
请问
1.酶消化过度是否会产生能存活但是生物学特性受损的细胞.
2.smc一般要求3-8代之内用,那大致是多少时间呢?时间太久的体外培养会导致细胞表型的改变.
3.成纤维细胞或者内皮细胞是否存在a-actin染色弱阳性?
谢谢各位
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sunshine039[使用道具]
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发表于 2014-8-2 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的血管平滑肌细胞传代以后总是好几个细胞聚在一起,一团一团的,贴壁以后象一朵一朵的菊花.我想请教一下这是啥原因?怎样才能改善?

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恭喜你，那是因为平滑肌细胞生长时具有峰谷状，说明你培养的是平滑肌细胞，而不是成纤维细胞。
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天蝎座[使用道具]
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发表于 2014-8-2 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
平滑肌细胞贴壁培养前三天不动它，到了第6、7天细胞才会长出来，有时候没有看到细胞并不是真的没有细胞，细胞可能在组织块下面而看不见。死细胞一般漂浮，园且折光好
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-8-2 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做过大鼠脑血管SMC，在培养皿铺上Matrigel，细胞长得还可以，就是不知道为什么传代就不长了，请教高手指点。谢谢。
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脱水萝卜[使用道具]
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发表于 2014-8-2 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为最近看到不少战友需要培养血管平滑肌细胞，存有不少这样那样的问题，大伙把问题放在这里一起讨论吧。
年年岁岁人不同，岁岁年年细胞相似。
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脱水萝卜[使用道具]
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发表于 2014-8-2 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近也是在用植快培养法培养细胞，但是我觉得原代操作中， 剥离动脉外膜和如何纵行剪开血管， 是比较复杂的操作， 有哪位高手，指点迷津，谢谢了！
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-8-2 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我帮师妹剥离过动脉外膜和纵形剪开血管，我第一次做就剪的很漂亮，要用纹丝钳和眼科剪，还有前面弯头的小镊子。剥离动脉挺费时，等慢慢一丝一丝的剥，但也不难，至于剪血管就很容易了，你用钳子钳夹住一端的血管壁，眼科剪伸进血管，就像裁缝剪步那样就一溜全剪开了。我说了半天不知道你明白么，还是要自己琢磨，熟练就容易了！
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-8-2 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们培养血管平滑肌采用的也是组织块法，尝试想用消化酶消化老养不成，但组织块法从组织块爬出细胞挺费时间，要好几个礼拜，一旦细胞传代后速度就快了，方法和上面说的差不多（北国木棉）但是我们胰酶浓度用的0.2％的，可供大家参考，还用双抗液用的浓度100U/ml。下面是一张组织块周围爬出的细胞。
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