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标题:【转帖】【求助】血管平滑肌细胞培养

箭头儿[使用道具]
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发表于 2014-8-2 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的血管平滑肌细胞传代以后总是好几个细胞聚在一起,一团一团的,贴壁以后象一朵一朵的菊花.我想请教一下这是啥原因?怎样才能改善?
我在培养平滑肌细胞中也遇到过这种情况，开始也不解，以为是长成了组织块，后来就知道是消化收集离心后重悬时没有完全吹打散开，所以就成了细胞团，种植贴壁后细胞就从团中爬出来，所以成了菊花样。下次吹散时吹久些，就解决了。祝你成功！
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avi317[使用道具]
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发表于 2014-8-2 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的问题看来在血清问题，我用的是国产小牛血清，已经等到心理承受能力极限了。哎。。。。
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荷塘青蛙！[使用道具]
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发表于 2014-8-2 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
今天收到一位战友提出来的问题，非常感谢这位战友的信任，其实我也是新手。
他的问题是：
培养用的组织块你是任何处理的，是用剪刀剪碎还是用刀片切成1*1的组织块？实在铺瓶后立即加入培基，1.5小时后反转培养瓶，还是铺瓶后待组织块周围液体较少时直接翻瓶？
我个人的经验是：
培养用的组织（如胸主动脉）从体内取出来后，直接置入DMEM的血清瓶中(注意：瓶中的DMEM的量能漫过组织就可)，在血清瓶中中经过一般的清洗，把血管外表的血丝洗一洗就可，然后 取出来含有D-Hanks液的平皿中，去除血管外表纤维组织，刮除内膜，稍微将平滑肌组织带有的水份用眼科镊刮除后，移入青霉素瓶中，滴入1－2滴的胎牛血清，然后用剪刀剪，一般剪100下，大概就是我们需要的组织大小了。铺瓶，加培养基，至于多少时间转正瓶子，主要还是看你铺瓶时候组织的湿度了，像我这样只在剪组织前加入1、2滴的血清的话，铺瓶时的组织一般的，所以我选择在1.5小时后翻正瓶子。
如果你铺瓶的时候发现组织还是比较湿的话，倒是有个小窍门：将瓶子横竖起来，待组织携带的水在重力的作用下集在一起，你再用吸管吸掉，这样也可以达到1.5小时后翻正瓶子的目的。
要知道，你越是晚翻正瓶子，你的细胞长出来的时间越是往后拖的哦。
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发表于 2014-8-2 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
贴壁种的组织块，三天后就有平滑肌细胞爬出，一两个组织块特多，第五天看的时候组织块周围都有很多平滑肌细胞，呈网状结构，可是在观察细胞的时候，发现组织块周围又很多（密密集集）圆形的小的细胞（不知道是不是细胞？？）这样的组织块周围就没有平滑肌细胞生长，并且据初步观察，这种东东能抑制平滑肌细胞的生长，
我的问题是，有没有培养主动脉平滑肌细胞的战友碰到过这样的情况？这种东东是什么？怎样才能除去？(以前培养的时候也有见，只是这次的平滑肌细胞比较成功，所以需小心些)
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发表于 2014-8-2 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没有啊，没有照出来，后来被我不小心给冲掉了连并爬出来的平滑肌，（郁闷ing）我这次又种上了，如果再出现这种情况的，再上传图片，我怀疑是血细胞，真的很纳闷。
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-8-2 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做过大鼠的胸主动脉平滑肌细胞原代培养，经验如下：
1 剪的组织块要小一点，尽量要有多角形，以便细胞爬出来；
2 操作过程中要避免过分牵拉血管；
3所用的大鼠不要太大，150g左右
4把组织块贴入瓶子中时，可以沾点百分之二十的胎牛血清，那样更容易铺平
这是我的一些小经验，以供参考
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发表于 2014-8-2 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的血管平滑肌细胞传代以后总是好几个细胞聚在一起,一团一团的,贴壁以后象一朵一朵的菊花.请教各位这是啥原因?怎样才能改善?

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刚巧手头上有这种菊花状的形状。大伙一起看看是不是呢？Blush


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发表于 2014-8-2 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再来一张20培镜的：


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发表于 2014-8-2 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有那位作过人脐动脉平滑肌细胞培养的战友们，请问原代培养后怎样才能成功传代呢!不胜感谢！
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 小中大
我这有刚拍了一张SMC原代培养后爬出来的细胞，供参考。
我正准备传代，不知该注意些什么，也有劳各位战友的宝贵建议！感谢


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