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标题:【转帖】【求助】血管平滑肌细胞培养

yonger[使用道具]
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发表于 2014-8-2 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的细胞是因为用胰酶消化后吹打的不够,细胞仍然成团,而且团很大,所以培养时细胞就是团块状的.以后尽可能吹打细胞使之吹散就可以了
试试吧
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superboy[使用道具]
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发表于 2014-8-2 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的血管平滑肌细胞传代以后总是好几个细胞聚在一起,一团一团的,贴壁以后象一朵一朵的菊花.请教各位这是啥原因?怎样才能改善?

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是啊。。我目前也是这个情况。。。。。。
请问大虾们，这些菊花是不是成纤维细胞阿？？？
感觉不太像平滑肌细胞呢。。。。。。。。。。
谁来回答以下阿
谢谢。。。。。。
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bs4665[使用道具]
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发表于 2014-8-2 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做过兔脑基地动脉平滑肌，，， 帖块法，，48小时之内就有细胞张出来，。快的话1周就能传带了 第一传的时候一传3，，3天之内就能张满5×5的瓶子。。。根本不需要铺什么胶，，我在台子外面取材，，然后放进台子里面。。。用的培养基是只加1。4克碳酸氢钠的高糖DMEM，，，碳酸氢钠切不可多加 否则细胞爬不出拉。。。。。。。关于翻面，，我认为倒置两小时比较好 组织块基本上完全贴了。。。有时候消化都消化不下来啊。。。。。。我发现 当细胞状态好的时候不会成菊花状 形态不好了就会。。。。
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langlang[使用道具]
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发表于 2014-8-2 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我这有刚拍了一张SMC原代培养后爬出来的细胞，供参考。
我正准备传代，不知该注意些什么，也有劳各位战友的宝贵建议！感谢

===================================

我个人觉得上面的细胞像是成纤维细胞呢。。。
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-8-2 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我最近也是在用植快培养法培养细胞，但是我觉得原代操作中， 剥离动脉外膜和如何纵行剪开血管， 是比较复杂的操作， 有哪位高手，指点迷津，谢谢了！

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呵呵，我也有同样的困惑：由于刚开始做，不知道如何顺利剥离动脉外膜。我在其他大鼠手术中，在显微镜下能够很清楚的看出血管外膜，但是在超净台内却分不清楚外膜，更不能像文献中所说的“袖套样”剥离，或者纵行剖开后大块的剥离，主要就是分不清结构，不知道各位有什么好方法没？谢谢
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2014-8-2 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我感觉翻瓶的时间尽量久点好，我一般是前一天晚上做，倒置瓶，第二天早上一大早加20％的培养基，细胞长得还是不错的，就是要注意在前一个礼拜不要动瓶子，不然不容易贴壁，细胞在5－6天时细胞就蛮多了。
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ending[使用道具]
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发表于 2014-8-2 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我下半年也要开始养平滑肌细胞，取的就是大鼠胸主动脉，用组织块法。
今天看到这么多高手的经验，真是受益非浅！希望以后大家多来指点。
我导师以前培养过平滑肌细胞，她说原代培养用20%牛血清（国产的）效果很好，7d就长开了。
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-8-2 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近用酶消化法养出了一些小鼠主动脉平滑肌细胞下面是放大200倍的照片麻烦大家给鉴定一下


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2014-8-2 17:17
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DONT[使用道具]
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发表于 2014-8-2 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
也做的小鼠的，贴壁法，20%进口胎牛。4d一般就有少量细胞爬出来了。
剥外膜的时候个人感觉还是管状的时候好剥，从一头找到外膜结构慢慢剥离即可，切开之后结构就很难掌握了。
倒是有一个问题请教，一般都说用3-8代，这个传代数指的就是用胰酶消化的次数吗？也就是说是从细胞融合后第一次用胰酶传代算是第二代开始吗？
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发表于 2014-8-2 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的是大鼠肺动脉血管平滑肌细胞培养 用贴壁法 其实细胞爬出来也就一天左右 如果两三天出不来一般就over了
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