小中大今天提了人外周血单核细胞，效果还可以，具体步骤如下：
1：10ml注射器抽取肝素，湿润注射器管壁后将肝素推出。抽取静脉血10ml。
2：取10mlPBS，将PBS与血1：1混合；取10mlFICOLL加入另一50ml离心管，将pbs与血的混合液沿管壁缓慢加入，速度要慢，保证两者之间有清晰界面。
3：1800rpm离心30min，可看见白膜状单个核细胞层，巴氏管缓慢吸取细胞层转入另一个15ml离心管，希望后向该离心管加入3mlPBS（以改变ficoll密度，充分沉淀细胞），1400rpm离心10min。
4：弃上清液，加入10mlpbs，混匀后1400rpm离心10min；再弃上清液，加入10mlpbs，混匀后1400rpm离心10min，如此重复3次。
5：细胞计数：1.52X10的6次方，接种于培养瓶中，置37℃，5％CO2培养箱培养4h后吸出培养基，用37℃预热的培养基清洗3遍，将未贴壁细胞洗脱。剩下的贴壁细胞即为单核细胞。
第一张是刚提取的，第二张是4小时候倒掉悬浮细胞的，第三张是4小时候的立体图片。
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我看你用的是ficoll，有没有人用过histopaque？偶没有经验金额哟share,我最近准备做外周血单核细胞分离，后续用来做分化实验，有问题会及时反馈，经验共享，延续这一非常有用的贴。
