生物制药

谈下自己对这个标准的认识，可能有不对的地方。请指正！
?Protein Concentration ----------------------70.9 mg/mL [63.0 -77.0] 该项目是检测蛋白浓度，可以用常规的
Folin－酚试剂法（Lowry法），因为测定是总蛋白浓度，所以不能作为鉴定、生物活性的评判
? Potency ---------------------- 100% [80 -125%] 该项目主要针对抗体药物的生物活性，可以用ELISA，或其他基于细胞的检测方法。
? ID (immunoassay) ---------------------- Pass 鉴定项目使用了免疫学方法，目前最简便、快捷的当属ELISA，其原理是特异性的抗原-抗体结合作用。
? SE-HLC ----------------------- MP: 99.8 %, HMW: 0.2 %, LMW: 0.0% [MP ≥ 99 %] 该项目俗称纯度，主要是为了检测制剂中的聚体（HMW 大分子物质），降解（LMW 小分子物质）。
SE-HLC应为 SE-HPLC即分子筛，这种方法能够根据分子量进行分离。但是，若要重点分析聚体，SE-HLPC也有其局限性。
? CE-SDS,reduced ----------------------HC+LC: 98.9 %, HC: 66.8 % LC: 32.1 % [LC+HC ≥ 98%]
CE是毛细管电泳；reduced是还原，能够打开轻链、重链。目前，国内用的较多的还是SDS-PAGE，毛细管电泳一般生产厂家购买的不多。后者与前者相比，在于能够高通量、更为精确、快速！
? CEX-HPLC ----------------------- MP: 89.6 %, Acidic: 2.7 %, Basic: 7.7 % [≥ 80%]
该项目是使用阳离子交换色谱检测主带、酸性变异、碱性变异的比例。这其实关注的是，抗体的电荷变异。这里多说一点，多种化学修饰都会引起抗体分子等电点的改变。如抗体分子的脱酰胺化、唾液酸化、重链C段赖氨酸清除造成偏酸电荷变异，赖氨酸/甘氨酸酰胺化反应、甲硫氨酸氧化作用等碱性电荷变异143（该文尚未发表）
? CEX-HPLC ID ----------------------- Pass
同上，用于鉴定
? Osmolality ----------------------- 314 mOsm/kg [300 ± 50]
这是渗透压，影响该项目的主要是制剂配方。
? pH ---------------------- 5.2 at 24.6°C [5.0 – 5.4]
不说了。
? Appearance ----------------------- Report
外观，不说了。
? Volume ----------------------- 1.2 mL (average 1.1525 mL, n = 5) [≥ 1 mL]
不说了。
? Sub-visible Particulate ---------------------- 29 particles/container ≥ 10 μm [no more than 6000]
这个不知道业内怎么称呼？求解。
3 particles/container ≥ 25 μm [no more than 600]
不说了。
? Sterility -------------------------------------- Pass
无菌，不说了
? Bacterial Endotoxin ----------------------- < 0.2 EU/mL [≤ 5.0]
内毒素，多用鲎试剂法
? CHOP ELISA ----------------------- 4.4 ppm
宿主蛋白，ELISA测定
? Protein-A ELISA -----------------------< 0.5 ppm
protein A 是纯化的第一步，可能有泄漏的可能，所以也要检测。
? DNA QPCR ----------------------- < 1pg/mg
宿主DNA，不说了，做重组蛋白药的都要测。
以上各项指标基本是反映了对抗体药物最终产品的质量要求，用到的一些方法也比较的明了，可以作为抗体药物开发的参考。
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鉴别试验应该是鉴别本生产地址生产的所有药品。因此，如果你只做一个产品，那么做ELISA就OK了。如果做多个单抗，建议做肽图，这是鉴别的真正含义。个人愚见

人源化/嵌合单抗的质量标准--检定项目
原液：
蛋白质含量、生物学活性、结合活性、SDS-PAGE、HPLC、等电点、相对分子质量测定、肽图、宿主DNA残留量、宿主蛋白残留量、蛋白A残留量、N-端氨基酸序列、其他杂质残留
成品：
外观、装量检查、水分测定（冻干制品）、pH、蛋白质含量、生物学活性、结合活性、无菌试验、异常毒性（豚鼠、小鼠）、热原质试验、内毒素
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结合活性是指抗原和抗体的结合力吗？如何测定呢？单抗测定了生物学活性还要测定结合活性？？

根据我们最近相关项目的进展情况，个人觉得在立项初期对原研药进行比较详细的分析是非常重要的，最好的是能买几个批次的产品，大概分析一下原研药的差异范围。在确定细胞株时非常重要的一点是与原研药在活性和理化性质（我们这边比较重视电荷差异和糖基化差异）的最大相似性，具体相似到什么程度，我觉得最起码峰的数量不要有差别，比例的话这个也真是说不好。之所以说细胞株很重要是因为我们这边之前有一个项目，选定的细胞株理化性质与原研药有差别，但是工艺优化了好久还是没有什么作用，最后只好选择沟通，解释了，很无奈
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你的细胞株的理化性质，具体是指什么？是用了不同的细胞株吗？比如原研药是用CHO，而你用的是293?

我们现在做单抗药物，发现用SEC的方法检抗体的降解产物局限性较大啊，如果只是抗体的几个基团被氧化或者破坏（比如加热和氧化剂破坏），SEC较难分开杂质啊，用C柱和离子柱拖尾又特别严重，请教各位高手有没有好的意见？

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SEC由于材料的限制，目前主要用于高分子杂质的检测；而对于降解或者氧化产物，更多的选择反相、离子交换色谱或高分辨率的毛细管电泳来进行常规研究（拖尾的话，只能说明方法需要优化），有条件的企业会用到LC-MS或LC-MS-MS进行研究，具体的细节就只能按样本讨论了