小中大再进来叹一下5-10g/L的表达量。一般来讲摇瓶的表达量都会比后期的生产工艺低的,毕竟后期的工艺开发一般都会采用fed培养,细胞的生长周期也会更长,细胞密度也会更大。但是之前的经验是,如果细胞的表达量过高的话,细胞的生长速度会比较慢,产生的蛋白翻译后修饰会不完全。所以筛细细胞株并不是要越高越好,盲目追求表达量的,要综合产品的质量和细胞的生长特性。
其次,细胞株的表达量即使很高对于产品的成本也不会降低太多,后期的蛋白纯化仍然会花费很高。相比较于培养基和培养体系,蛋白纯化的填料更加昂贵。
仍然希望大家来继续讨论,给自主创新项目加油!
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除去浓缩补料外,摇瓶培养很大的瓶颈是中后期溶氧跟不上,导致了细胞状态肯定不好。楼主的5-10g/L定量肯定是比较粗略的,精确测表达应该是用HPLC
我特别认同您说的关于“蛋白翻译后修饰”的观点,如果一个细胞蛋白翻译量很大,但内质网、高尔基体的修饰能力有限,会导致胞内聚集未折叠蛋白,太多的话会导致细胞凋亡,而且对下游纯化的压力也很大