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标题:【求助】pcr，求分析

luoliqiong[使用道具]
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发表于 2014-9-25 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】pcr，求分析

前图是用一个人的模板DNA做的梯度pcr， 后图是在梯度之后分别用10个人模板的pcr，maker是2000bp，目的条带是256bp，求分析


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2014-9-25 11:30
阳性.jpg (15.62 KB)
 
2014-9-25 11:30
阴性.jpg (12.31 KB)
 
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IAM007[使用道具]
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发表于 2014-9-25 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那十个人的DNA检测了么？
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发表于 2014-9-25 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
模板浓度很低啊
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luoliqiong[使用道具]
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发表于 2014-9-25 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 IAM007 于 2014-9-25 11:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

那十个人的DNA检测了么？

模板浓度测了，10ng/微克以下。我加大浓度以后还是p不出来，和图2没有异常。
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发表于 2014-9-25 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
完全就是没有P出来，全是引物二聚体。
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2014-9-25 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果真的是引物二聚体的话，你可以该考虑下退火温度选择是否正确。
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发表于 2014-9-25 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这么小的片段怎么用这么大的marker啊，跑到最后是二聚体还是目的片段都看不清了，建议换个浓度1.5% 的胶+ 1000bp的marker重跑下，再看。如果是二聚体可以考虑跑个梯度PCR摸索一下退火温度，或者增加一点循环数
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2014-9-25 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
退温或引物有问题
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2014-9-25 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
2000marker最下面那条是100bp，第一个图的条带应该是250多一点，但是似乎也有100以下的（估计引物二聚体）
第二个图就是除了引物二聚体啥都没有
模板浓度太低了，基本上我觉得可以重提了
先摸引物退火温度
如果是目的条带不亮，据说可以把第一次PCR之后的产物作为模板再扩一次（这样做不一定有结果，而且如果是除了引物二聚体没别的的话，扩多少次也是浪费。。）
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cocacola[使用道具]
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发表于 2014-9-25 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做梯度的时候不是已经扩出来了吗，只是产物少，而在有图根本就没有目的提哦啊带，如果是按照左图的条件p的结果，可能是模板有问题。
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